[发明专利]检测排泄物中microRNAs作为肺癌、结直肠癌和膀胱癌早期诊断生物标志

说明书

技术领域

本发明属于医学诊断技术领域，具体涉及肿瘤特异性microRNAs的筛选，针对肿瘤特异性microRNAs的检测体系的建立和优化，及其在癌症筛查和早期诊断中的应用。 

背景技术

上皮细胞癌变的组织包括消化系统的食道癌、胃癌、胰腺导管癌、结直肠癌，呼吸系统的肺癌以及泌尿系统的膀胱癌等。这些癌症的死亡率均呈逐年上升趋势，而对高危人群的筛查和早期诊断可以有效降低死亡率，但现在并没有理想的无创筛查方法。microRNAs(miRNAs)是在基因表达调控中发挥广泛作用的非编码小分子RNA，在肿瘤形成的过程中往往有异常表达，而特殊的miRNAs表达谱可区分不同类型的癌症。上皮细胞癌变后，肿瘤细胞会脱落，随排泄物排出体外，因此排泄物(包括粪便、尿液、痰液)中的miRNAs可作为一种非常有潜质的无创肿瘤标志物。 

在粪便miRNAs诊断消化系统肿瘤方面，2009年，Ahmed et al对结直肠癌筛查的研究中表明，有7种miRNAs在结直肠癌病人癌变组织和粪便中的表达异常增加(miR-21、miR-106a、miR-96、miR-203、miR-20a、miR-326和miR-92)，另外有7种表达下降(miR-320、miR-126、miR-484-5p、miR-143、miR-145、miR-16和miR-125b)(Ahmed FE，Jeffries CD，Vos PW，et al.Diagnostic microRNA markers for screening sporadic human colon cancer and active ulcerative colitis in stool and tissue.Cancer Genomics Proteomics，2009，6(5)：281-295)。2010年，Link et al发现miR-21和miR-106a在结直肠腺瘤患者粪便中的表达比结直肠癌患者的要多，并且其表达量会随TNM分期的增高而降低(LinkA，Balaguer  F，Shen Y，et al.Fecal MicroRNAs as novel biomarkers for colon cancer screening.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2010，19(7)：1766-1774)。2012年，Wu et al认为miR-92a在结直肠癌病人的癌变组织和粪便中的含量分别高于癌旁组织和正常人粪便，并且与正常人粪便相比，miR-92a在结肠息肉患者粪便中的表达量也明显增高，通过进一步数据分析显示，miR-92a诊断远端结直肠癌比近端结直肠癌的灵敏度要高，诊断高危腺瘤比结肠息肉的灵敏度要高(Wu CW， Ng SS，Dong YJ，et al.Detection of miR-92a and miR-21 in stool samples as potential screening biomarkers for colorectal cancer and polyps.Gut，2012，61(5)：739-745)。而在2010-2012年间，陆续有一些研究组证实，miR-144、miR-17-92簇和miR-135在结直肠癌患者粪便中明显增高，后两者诊断结直肠癌的灵敏度和特异性分别为74.1％和79.0％(Li JM，Zhao RH，Li ST， et al.Down-regulation of fecal miR-143and miR-145as potential markers for colorectal cancer.Saudi Med J，2012，33(1)：24-29.Koga Y，Yasunaga M，Takahashi A，et al.MicroRNA expression profiling of exfoliated colonocytes isolated from feces for colorectal cancer screening.Cancer Prev Res(Phila)，2010，3(11)：1435-1442.Kalimutho M，Del Vecchio Blanco G，Di Cecilia S，et al.Differential expression of miR-144*as a novel fecal-based diagnostic marker for colorectal cancer.J Gastroenterol，2011，46(12)：1391-1402.)。