[发明专利]一种贻贝肉蛋白抗氧化肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及到蛋白抗氧化肽，具体指一种贻贝肉蛋白抗氧化肽及其制备方法。

背景技术

抗氧化剂是一类可以减弱或者祛除自由基对人体损害和保护食品免受氧化损伤变质的一类物质，主要分为天然和化学合成两种类型。目前，以丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）为代表的化学合成抗氧化剂由于价格相对便宜、抗氧化活性好，从而被广泛地应用到食品工业中。但是，现有研究表明化学合成抗氧化剂在不同程度上对人体的肝脏、肾脏等器官均有不利影响。因此，化学合成抗氧化剂的应用受到了较大影响，部分发达国家已限量或禁止使用对人体有毒副作用的化学合成抗氧化剂。因此，寻找高效、安全的天然抗氧化剂替代化学合成抗氧化剂成为研究热点。

贻贝属软体动物门、瓣鳃纲、贻贝目、贻贝科，贻贝属，是海产双壳贝类，俗称青口、海红，素有“海中鸡蛋”之称，其蛋白质含有人体需要的缬氨酸、亮氨酸等8种必需氨基酸，且含量远高于鸡蛋、鸡、鸭、鱼、虾和肉类。已有研究表明，贻贝提取物或贻贝肉酶解物具有抗肿瘤、降血脂、抗凝血、降血压、抗氧化、提高免疫力等活性功能，专利号为ZL200510110096.8的中国发明专利公开了一种《厚壳贻贝的提取物、制造方法及其用途》，其是利用厚壳贻贝的提取物在抗流感和抗SARS病毒方面的应用；专利号为ZL200510024391.1的中国发明专利公开了《一种可提高免疫力功能的厚壳贻贝提取物》，其是关于厚壳贻贝的提取物在免疫调节方面的应用；申请号为201010296130.6的中国发明专利申请公开了一种《抗前列腺癌贻贝酶解提取物的制备方法及应用》，其是利用贻贝肉碱性蛋白酶（Alcalase）酶解提取物对前列腺癌细胞具有良好的增殖抑制作用。以上专利对贻贝的精深加工和活性开发具有重要意义。但是以上专利所提到的活性物质多为粗提取物或总酶解物，成分复杂，质量控制难度较大，从而在应用中受到多个方面的限制

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种能够清除自由基和抑制脂质过氧化作用的贻贝肉蛋白抗氧化肽，其可作为药品、保健食品和食品的安全添加剂。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种贻贝肉蛋白抗氧化肽的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该贻贝肉蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽为五肽化合物，氨基酸序列为YPPAK(Tyr-Pro-Pro-Ala-Lys)，ESI-MS检测给出分子离子峰m/z[M+H]+575.26。

上述贻贝肉蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

1）将洗净、去壳的贻贝肉用高速组织捣碎机处理成匀浆，然后按照料液比1g:2~4mL加入异丙醇，于30~35℃中脱脂20~24h，然后于2～6℃、4000~5000rpm离心10~15min除去异丙醇，收集脱脂贻贝肉固形物；

2）所述脱脂贻贝肉固形物按固液比1g:20~25mL加入浓度为0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，调节pH为6.5~7.5，得到混合液；

3）将所述混合液温度升至55~65℃搅拌预热10~15min，以所述脱脂贻贝肉固形物的质量为基准加入2.0~4.0%的蛋白酶，在55~65℃酶解2~4h，得到酶解产物；

4）将步骤3）所得的酶解产物升温至95~100℃后恒温保持8~10min后，冷却至20~25℃，然后离心，得到酶解液；

5）将上述酶解液加入0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，使其浓度为20~25mg/mL，按照大孔树脂重量与酶解液体积1g:40~50mL的比例将酶解液加入到大孔树脂层析柱中，然后用纯度为45～55%的乙醇进行洗脱，最后在温度40℃以下，真空度-0.1MPa以下旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉；

6）将上述脱盐酶解物干粉溶于pH为6.8～7.2的0.04～0.06mol/L的磷酸盐缓冲液中配成浓度为8～12mg/mL的溶液，于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的工作温度下采用超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa部分，得到超滤酶解液，超滤酶解液冻干后，得超滤酶解液冻干粉；