[发明专利]结缕草耐盐性主效基因位点qLF-1的分子标记方法

说明书

  

一、技术领域

本发明提供了结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的分子标记方法，属于分子遗传学领域，专用于结缕草耐盐新品种选育和种质资源的利用。

二、背景技术

 土壤盐碱化是一个世界性的问题，全世界盐碱地面积近9.6×10⁸hm²，我国有盐渍土3.47×10⁷hm²，相当于耕地面积的1/3。随着滨海盐碱地区的开发和园林绿化的需要，对草坪草的耐盐性提出越来越高的要求，结缕草属植物作为一种重要的草坪草，培育优质耐盐的结缕草属植物新品种是一项非常重要的任务。

前期研究结果表明，与其它草坪草相比，结缕草属植物具有较强的耐盐性，但结缕草属内的不同种以及同一种的不同种源间的耐盐性存在较大的遗传变异。因此要选择一种优质耐盐的结缕草进行盐碱地绿化，耐盐性鉴定是一项非常重要的工作。目前，关于结缕草属植物耐盐性的鉴定均是通过水培法或土培法进行的，虽然这两种方法是区试之前，最直接最有说服力的耐盐性鉴定方法，但是通过以上两种方法进行耐盐性鉴定需要非常大的工作量，费时费力，且容易受环境的影响。当从大批量材料中筛选耐盐材料时有相当的困难。使结缕草耐盐性育种进程受到很大影响。 

遗传研究结果表明结缕草的耐盐性存在主效基因位点（郭海林等. 结缕草（Zoysia japonica）耐盐性的遗传分析. 植物遗传资源学报, 2012, 13(5):733-738.）。因此利用分子生物学的手段，通过构建结缕草属植物的遗传图谱，并对其耐盐性的主效基因位点（Quantitative Trait Loci, QTL）进行分析，找到与耐盐性主效QTL紧密连锁的分子标记对品种的耐盐性进行鉴定，将大大地节约成本，提高育种和选择效率。 

三、发明内容

技术问题：本发明针对上述情况，提供一种结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的分子标记方法，通过检测这些耐盐性主效基因位点连锁的分子标记，可以预测结缕草的耐盐性强弱，提高耐盐结缕草的选择效率。

技术方案：

用标记引物Me12Em1的左端引物序列5’-TGAGTCCAAACCGGTAG-3’ 和右端引物序列5’-GACTGCGTACGAATTCAA-3’

对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出180bp DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的存在；

或标记引物Me5Em1的左端引物序列5’-TGAGTCCAAACCGGTGC-3’和右端引物序列5’-GACTGCGTACGAATTCAA-3’

对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出315bp的DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的存在，该主效基因位点位于第4连锁群的36.28cM处，利用mapQTL5.0软件测得对结缕草耐盐性的贡献率为13.1%。

  

有益效果：

本发明所提供的结缕草耐盐主效基因位点的分子标记方法，其有益效果在于：

通过本发明在国际上首次公开了结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的存在，该主效基因位点位于第4连锁群的36.28cM处，利用mapQTL5.0软件测得对结缕草耐盐性的贡献率为13.1%。通过与耐盐主效基因位点相关联的分子标记Me5Em1-315，Me12Em1-180对结缕草的耐盐性进行鉴定，可以克服水培法和土培法易受环境影响，工作量大等缺点，特别是对大批量种源材料或者杂交后代进行耐盐性鉴定时将表现出明显的优势，大大减少人力物力的浪费，提高育种和选择效率。

  

附图说明：

图1：结缕草耐盐性QTL连锁群定位分析示意图，其中：包含QTL的连锁区段被显示，左侧为标记之间的距离（cM），右侧为标记名称。

  

四、具体实施方式

（一）结缕草F1耐盐分离群体的构建与耐盐性鉴定