[发明专利]一种制备光合细菌菌液的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备细菌菌液的方法，尤其涉及一种制备光合细菌菌液的方法。 

背景技术

光合细菌(photosynthetic bacteria，简称PSB)，是地球上最古老的具有原始光能合成体系的原核生物，是在厌氧条件下进行光合作用且不产生氧气一类细菌的总称，这是与绿色植物、藻类及其他光合作用生物不同之处。光合细菌广泛分布于沼泽、池塘、湖泊、河流、水沟、海洋及土壤中，是一种优良的水产环境改良剂和饲料添加剂。目前光合细菌菌液制备方法都很繁琐，培养基的成分复杂，大多是在特殊培养基中进行培养，而且是在一定的pH值和光照强度下进行培养，现有制备方法的缺陷在于制备所用的培养基中往往需要添加某种或某些特殊物质，如促酵剂、木瓜提取液、槲寄生提取物等，成分复杂，配制繁琐，而且制备过程中多数需要特殊的光照。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种培养过程简单的制备光合细菌菌液的方法。 

本发明解决技术问题的技术方案是： 

一种制备光合细菌菌液的方法，其步骤是： 

(1)菌种的复苏 

将装有光合细菌菌种的冻存管进行菌种快速溶解复苏，溶解后的菌液成为复苏菌液； 

(2)菌液划线及静置培养 

在超净工作台上，用复苏菌液在平板固体培养基上划线，将划线后的平板固体培养基在30℃恒温培养箱中静置培养24～36小时长出单菌落后，用接种环挑取平板固体培养基上的单菌落在斜面培养基上划线，划线后的斜面培养基在30℃培养箱中静置培养24～36小时菌落长出； 

(3)菌落洗脱及培养： 

菌落长出后，用光合细菌菌液培养基将斜面培养基上的菌落洗脱下来成 为菌落溶液，菌落溶液进行初次培养即可得到初次培养菌液，初次培养菌液再进行转接培养即可得到转接培养菌液。 

在上述步骤(1)中，所述菌种快速溶解复苏的方法是：将装有光合细菌菌种的冻存管立即放置于温度为38℃～40℃的水浴中复苏并快速摇动，直到冻存管内部结冰全部溶解为止。 

在上述步骤(2)中，所述平板固体培养基配制方法为：将5克蛋白胨、1克酵母浸粉、0.1克磷酸高铁、20克琼脂、1000毫升煮沸海水加热溶解，并用浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液调节到pH为7.6的培养基溶解液装于锥形瓶中，然后将装有培养基溶解液的锥形瓶置于高压蒸汽灭菌器中，在温度121℃，压力105kPa的条件下灭菌25分钟，然后将装有培养基溶解液的锥形瓶从高压蒸汽灭菌器取出，锥形瓶内的培养基溶解液在凝固之前倒入经灭菌的培养皿中冷却凝固到室温即可得到平板固体培养基。 

在上述步骤(2)中，所述斜面固体培养基配制方法为：将5克蛋白胨、1克酵母浸粉、0.1克磷酸高铁、20克琼脂、1000毫升煮沸海水加热溶解，用浓度为1mol/L氢氧化钠溶液调节到pH为7.6成为培养基溶解液分装于试管中，试管用棉塞封口，然后试管竖直置放入高压蒸汽灭菌器中，在温度121℃，压力105kPa的条件下灭菌25分钟，然后试管从高压蒸汽灭菌器取出，在培养基溶解液凝固之前，将试管倾斜成与水平面成45度角的斜面，培养基溶解液自然凝固到室温即可得到斜面固体培养基。 

在上述步骤(3)中，所述初次培养是将菌落溶液混合均匀后装入三角烧瓶中，牛皮纸包扎封口后，置于摇床上震荡培养，摇床上震荡培养的条件是温度28℃～35℃，转速50rpm。 

在上述步骤(3)中，所述转接培养为摇床震荡培养，摇床震荡培养的条件是接种量10％，温度28℃～35℃，转速50rpm。 

在上述步骤(3)中，所述转接培养为在恒温培养箱中的静置培养，静置培养的条件是接种量20％，温度28℃～35℃，每天不定时摇晃3～6次。 

在上述步骤(3)中，所述光合细菌菌液培养基配制方法为：称取酵母浸粉0.5克，称取蛋白胨3克溶于1升煮沸海水，溶解后的溶液装入三角烧瓶中，用牛皮纸包扎封口后，在高压蒸汽灭菌器中，在温度121℃，压力105kPa的条件下灭菌25分钟，灭菌后自然冷却到室温即可得到光合细菌菌液培养基。 

本发明的技术效果是：本发明固体培养基配制简单，仅需要酵母浸粉、蛋白胨、磷酸高铁、琼脂和煮沸海水配制，光合细菌菌液培养基仅需要酵母浸粉、蛋白胨和煮沸海水。培养所需设备简单，仅需要一个可温控的摇床培养箱或恒温培养箱即可。制备出来的光合细菌菌液浓度高，质量好。因此，本发明方法具有培养基配制及培养过程简单，菌液浓度高，质量好的特点。 

附图说明