[发明专利]一株纳豆芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株纳豆芽孢杆菌及其应用，属于微生物及医药应用领域。

背景技术

当今，人类健康最大的“杀手”是心脑血管疾病，血栓是心脑血管疾病最突出的表现形式之一。血栓原本只是老年人的易发疾病，但如今亦开始呈现年轻化的趋势。因此，开发一种治疗血栓的药物具有深远的社会价值和广阔的市场空间。

纳豆是一种功能性风味产品，具有溶血栓的作用，从中分离出一种新的纳豆芽孢杆菌，对其进行发酵培养生产具有抗血栓作用的酶制剂，能够起到较好的针对血栓的预防、保健和治疗的作用。

纳豆芽孢杆菌为好氧菌，广泛分布在水、空气和土壤中，其在孢子状态下稳定性良好，能耐压、耐高温、耐酸碱，能够在胃酸环境下保持活性。因此，能够广泛应用在微生物发酵医药领域。本品是一种益生菌，具有无毒、无副作用、安全高效的特点，因而可以做为发酵生产抗血栓酶制剂的菌种。

发明内容

本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)W-0923 是从湖北恩施地区苗圃土壤中采用土壤稀释分离法分离获得到的，已于2012年12月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，保藏号为CCTCC：M2012496)。

本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)具有以下微生物学特性：菌落近似圆形、菌落边缘树杈状参差不齐、表面褶皱干燥、灰白色、不透明、菌体杆状、单生或成短链，周生鞭毛、革兰氏阳性、具芽孢。

本发明纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)的培养方法或繁殖方法：菌种活化保藏培养基采用LB培养基，配方：胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L，Nacl 10g/L，水1000ml，PH7.0；种子液培养基；发酵培养基。

该纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)可以用作血栓溶解制剂，起到溶解血栓的作用。

具体实施方式

实施例1:

1、纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)的分离与纯化

（1）湖北恩施地区苗圃土壤表层到15cm处取样200g，每个地点采几个样本，混合过粗筛，取25g作分离用；

（2）培养基平板制备：将上述LB平板在配方胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Nacl 10g/L基础上加琼脂15g，水1000ml，PH7.0，121℃灭菌15min，倒平板，冷却；

（3）将（1）中的纳豆粉碎，称取1g，与无菌生理盐水混合于试管中，在85℃水浴中加热10min，后震荡混匀，制成纳豆粉悬液，静置1min，取上清液梯度稀释至10^-7；

（4）取（3）中10^-7 悬液200μL，加入到LB平板上，用涂布棒涂匀，放入37℃培养箱倒置培养24h；

（5）取上述平板菌落中较大较好的菌落，进行平板划线，连续三代，达到纯培养，最后菌种保藏。

2、菌株鉴定

（1）微生物学特性：菌落近似圆形、菌落边缘树杈状参差不齐、表面褶皱干燥、灰白色、不透明、菌体杆状、单生或成短链、周生鞭毛、革兰氏阳性、具芽孢。

（2）生化特性如表1所示：

表1 纳豆芽抱杆菌(Bacillus natto)生化特性