[发明专利]小麦人工小分子RNA表达载体、其构建方法及应用

权利要求书

1.小麦人工小分子RNA，其核苷酸序列为：

5’-AAUGGUCACUAUM’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’AGACCACGCCUGCCGGCCGGCCGUAGCCAUGCAUCUGCAUGCGGUGGUGGCUCUCAGUGCUCUUU-3’；

其中，M为A、U、G或C，M’为根据天然配对方式与M互补的碱基；序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM与序列M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’A反向互补，且序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM中第4、9和12位的碱基分别与序列M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’A中第18、13和10位的碱基形成错配；序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM由小麦靶基因编码，其碱基组成满足G+C含量为55%~58%。

2.一种小麦人工小分子RNA表达载体，其特征在于，其为含有以下序列的用于植物转化的表达载体：

5’-AATGGTCACTATN’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’AGACCACGCCTGCCGGCCGGCCGTAGCCATGCATCTGCATGCGGTGGTGGCTCTCAGTGCTCTTT-3’；

其中，N为A、T、G或C，N’为根据天然配对方式与N互补的碱基；序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN与序列N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’A反向互补，且序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN中第4、9和12位的碱基分别与序列N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’A中第18、13和10位的碱基形成错配；序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN来自小麦靶基因，其碱基组成满足G+C含量为55%~58%。

3.根据权利要求2所述的小麦人工小分子RNA表达载体，其特征在于，所述用于植物转化的表达载体为植物双元表达载体。

4.权利要求2或3所述小麦人工小分子RNA表达载体的构建方法，其特征在于，通过基因工程的方法将序列5’-AATGGTCACTATN’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’AGACCACGCCTGCCGGCCGGCCGTAGCCATGCATCTGCATGCGGTGGTGGCTCTCAGTGCTCTTT-3’整合至用于植物转化的表达载体中；

其中，N为A、T、G或C，N’为根据天然配对方式与N互补的碱基；序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN与序列N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’A反向互补，且序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN中第4、9和12位的碱基分别与序列N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’N’A中第18、13和10位的碱基形成错配；序列TNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN来自小麦靶基因，其碱基组成满足G+C含量为55%~58%。

5.权利要求2或3所述小麦人工小分子RNA表达载体在调控植物基因表达、改良目标性状及候选基因功能验证中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物包括单子叶植物和双子叶植物。