[发明专利]一种从红腺忍冬花制备总酚酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制备技术，尤其涉及从红腺忍冬花中分离纯化总酚酸的工艺方法。 

背景技术

红腺忍冬(Lonicera Japonica)为忍冬科植物，是我国常用中药，具有清热解毒、抗菌消炎、保肝利胆的功能。常以干燥花蕾或初花入药。列在2005年版中国药典“山银花”项下，红腺忍冬资源丰富，主产于河南、山东、云南及广西等地，是山银花药材商品的主要来源之一。山银花对多种致病菌均有抑制作用，是一种广谱抗菌中药，有“中药之中的青霉素”之美称。红腺忍冬山银花煎剂及醇浸液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎杆菌、脑膜炎双球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、百日咳杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、霍乱弧菌等多种革兰阳性和阴性菌均有一定的抑制作用。红腺忍冬山银花水煎剂（1:20）在人胚肾原代单层上皮细细胞组织培养上，对流感病毒、孤儿病毒、疤疹病毒均有抑制作用，能抑制病毒的复制、延缓病毒所致细胞病变的发生。红腺忍冬山银花在细胞外抑制柯萨奇及孤儿病毒的作用很明显，红腺忍冬山银花煎剂对钩端螺旋体有抑制作用。 

长期以来，红腺忍冬山银花花蕾和初花一方面大量入药，另一方面还作为提取酚酸类化合物的工业原料。化学和药理研究证实其主要化学成分有挥发油类、酚酸类、黄酮类和苷类，药理作用主要有抗菌、抗病毒、解热和抗氧化，酚酸类化合物(CHA)是红腺忍冬山银花花蕾和初花的主要有效成分，包括绿原酸、异绿原酸和咖啡酸等成份。其抗菌作用的主要活性成分为酚酸类化合物，但品种与产地不同而不同，因此山银花中总酚酸含量的高低，是其质量优劣的重要标志。 

目前有关金银花及山银花等植物绿原酸的提取分离研究报道较多,但有关红腺忍冬花中总酚酸的研究报道几乎没有，更无有关制备方法及工艺优选报道,本研究采用固相萃取工艺对红腺忍冬花总酚酸进行分离纯化制备,同时对制备工艺进行优化，通过制备总酚酸及获取最佳制备条件,旨在为红腺忍冬花及酚总酸类物质的医药及保健食品开发利用坚实基础,为红腺忍冬花总酚酸的进一步开发利用及质量标准制定提供实验依据。 

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种从红腺忍冬花制备总酚酸的方法，以解决上述背景技术中的缺点。 

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现： 

一种从红腺忍冬花制备总酚酸的方法，通过以下步骤来实现：

（1）原料预处理：选取当年生红腺忍冬山银花（Lonicera hypoglauca Miq）的新鲜药材，于60℃烘干，粉碎，以60目筛过滤，再以60℃烘干至恒重，置于干燥器中备用；

（2）超声波提取：取经过预处理的药材，添加8~13倍重量于药材的无水乙醇作为提取溶剂，进行超声波提取，提取温度保持常温，超声功率为200~300w，超声时间20~40min，经过超声波提取后，以5000r/min的速度离心10min，上清液备用，沉淀部分再加入4~6倍重量于沉淀的无水乙醇，重复超声波提取，合并上清液，弃去剩余沉淀；

（3）浓缩样品：将超声波提取的上清液通过减压、加热等常规手段进行浓缩，将上清液制成膏状物以备用；

（4）固相萃取：对浓缩后的膏状物进行固相萃取：

①活化固相萃取柱：用乙醇溶液或去离子水冲洗萃取柱，净化萃取柱，建立合适的萃取环境，提高其活化性；

②制样：将浓缩的膏状样品溶于加热的去离子水中，制成样品溶液，用HCl溶液调整样品pH至3~5，保持恒温40~50℃；

③上样：将样品溶液冷却至室温后，逐渐加入固相萃取柱中，样品溶液通过固相萃取柱中的固定相，样品溶液中的分离物和部分杂质干扰物滞留在固定相上；

④淋洗：以无水乙醚为淋洗剂充分淋洗固相萃取柱，将固定相上的杂质干扰物淋洗下去，使固定相上保留的只有分离物，并使固定相的pH调整至6~7；

⑤洗脱：以乙醇溶液为洗脱剂通过固相萃取柱，将固定相上的分离物洗脱下来，收集；

（5）后处理：将固相萃取的洗脱液收集后，通过减压、加热等常规手段将溶液蒸发干净，制成粉末状分离物，即产品总酚酸粉末。

在本发明中，所述固相萃取中制样阶段采用的制样溶剂和洗脱阶段的洗脱剂都为60%~80%的乙醇水溶液。 

在本发明中，所述固相萃取柱所采用的固相萃取柱填料为键合C₁₈硅胶与石墨化碳（SampliQ）的混合物，混合比例为1:1。