[发明专利]一种固定化复合酶及利用该酶处理蒜氨酸废液的方法

权利要求书

1.一种固定化复合酶，其特征在于：包括固定在环氧基大孔树脂中的破壁酶和除蛋白酶，其中所述的破壁酶为果胶酶或纤维素酶或半纤维素酶；除蛋白质的酶为菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的固定化复合酶，其特征在于：所述破壁酶与除蛋白酶的用量比例按酶活计为1：3~3：1。

3.制备权利要求1所述固定化复合酶的方法，其特征在于：具体步骤如下：

将选取1.0g的树脂载体溶胀；将破壁酶及除蛋白酶分别用pH为4.5~6.5缓冲液配置成15mg/ml的酶溶液，之后分别吸取5.0~15.0ml破壁酶及除蛋白酶溶液并转移到锥形瓶中，然后再用移液管吸取40.0~80.0ml上述pH为4.5~6.5的缓冲溶液置入锥形瓶中，轻微摇动使体系混合均匀，把溶胀的环氧基大孔树脂加入到锥形瓶中，用保鲜膜将锥形瓶盖好，然后放入35℃恒温振荡器中，在200rpm转速条件下，震荡6h，使其充分固定即得。

其中所采用的缓冲溶液是浓度为0.05mol/L的醋酸溶液和浓度为0.05mol/L醋酸钠溶液，或浓度为0.05mol/L柠檬酸溶液和浓度为0.05mol/L柠檬酸钠溶液；

所述的树脂为环氧基大孔树脂。

4.应用权利要求1所述固定化复合酶提取蒜氨酸废液中大蒜多糖的方法，其特征在于：具体步骤如下：

取蒜氨酸废液，用浓度为1mol/L的氢氧化钠和浓度为1mol/L的盐酸溶液调节至pH值为4.5~6.5，取5~20mg上述制备的固定化复合酶加入到200~800mL上述pH值为4.5~6.5蒜氨酸废液中，置于恒温震荡器中酶解，酶解温度为35~55℃，转速在200~400rpm，pH值为4.5~6.5，时间为60~100min；酶解后酶解液经过滤、0.5μm-5μm的超滤膜分离、浓缩、干燥得到大蒜多糖产品。

5.根据权利要求4所述的提取蒜氨酸废液中大蒜多糖的方法，其特征在于：

所述的蒜氨酸废液采用如下方法获得：

微波处理使大蒜片中的蒜氨酸酶失活，然后调节匀浆机8000r/min将大蒜片制成蒜浆，常温下循环超声波提取得到大蒜粗提取液，过滤，滤液流经离子交换树脂，25w/w%氨水洗脱树脂吸附的蒜氨酸得到蒜氨酸溶液，残留液为蒜氨酸废液；

其中所采用的离子交换树脂为丙烯酸型阳离子交换树脂。

6.根据权利要求4所述的提取蒜氨酸废液中大蒜多糖的方法，其特征在于：

所述的超滤膜分离时，所用组件为中空纤维膜组件或陶瓷膜组件或平板膜或卷式膜；所采用的过滤为减压过滤。