[发明专利]一种高剂量地衣芽孢杆菌活菌组合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及本发明涉及一种高剂量地衣芽孢杆菌活菌组合物及其制备方法和用途。

背景技术

益生菌属于一种微生态制剂，联合国粮农组织/世界卫生组织将益生菌定义为：“活的微生物，当摄入达到足够数量时将对宿主的健康带来益处”。在这个定义包含3个关键点：首先是活菌，其次是有效剂量，最后是能产生有益健康的作用。前两点属于质量标准的范畴，第三点属于健康声称的范畴。所有益生菌的立法和指导准则都是围绕这三点进行细化的。

活性是关键，益生菌必须是“活的”，才能起到健康作用，这是益生菌产生功效的基础；其次，益生菌的临床效力与每日摄入量密切相关。大量的益生菌生理效应研究（如治疗腹泻、乳糖不耐受、提高粪酶活性等试验室研究）证实，每日有效摄入量为10⁹-10¹⁰CFU。

对于急性或者慢性胃肠道感染、免疫或炎性疾病，益生菌的效果依赖于菌株选择，不同的治疗也需要不同的剂量。不可能制定统一的益生菌剂量标准，治疗所需的剂量要依靠大量的研究来确定。益生菌达到临床效应的活菌数，一般小肠中每克内容物的活菌数量≥10⁶CFU，结肠中每克内容物的活菌数量≥10⁸CFU。治疗急性感染性腹泻更需要短疗程、高剂量的益生菌制剂。世界胃肠组织临床指南对益生菌、益生元总结了一些临床状况。所需益生菌的剂量因菌株和产品不同而差异很大。虽然很多非处方产品提供的剂量范围为10⁹-10¹⁰CFU/剂，但是某些产品被发现在较低剂量时也有效，而某些产品所需的剂量则要多得多。确定益生菌的普遍剂量是不现实的，剂量必须是针对菌株，来源于提示有健康功效的体内试验。

发明专利92113318.9公开了一种地衣芽孢杆菌CMCC63516（CGMCC No.0183）制成的微生态制剂，即整肠生。用于治疗成人急性、慢性腹泻及各种原因引起的肠道菌群失调症，该专利提供的这种微生态制剂为每克活菌数9-11亿，北京协和医院吴梓涛等开展的Ⅱ期临床的推荐剂量为每日摄入量1.5×10⁹CFU。地衣芽孢杆菌进入肠道后，需要快速的生长、增殖成为优势菌群后才得以实现其药效的发挥，拮抗葡萄球菌，酵母样菌等致病菌，促进双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌、消化链球菌生长，从而调整菌群失调达到治疗目的，且具有无副作用，无残留等优点。但遗憾的是，目前针对该产品使用剂量方面的研究较少，吴铁林等人报道的应用地衣芽孢杆菌调治肠道菌群失调的研究，通过动物试验证实了地衣芽孢杆菌63516极低的生物毒性，亚急性毒性试验中，相当于LD₁₀十分之一的计量可达37500亿/Kg；李玲等人报道整肠生常规剂量对于慢性肠炎的治疗，效果较好。对于急性腹泻，冯婉玉等人报道整肠生大剂量治疗给药具有良好效果，但均未就其最佳的剂量进行深入的研究。

有些患者为了不影响正常的工作和生活，希望快速解决腹泻等相关疾病的困扰，所以在服用地衣芽孢杆菌活菌制剂时，均会自主加大用药量。虽然达到了起效快、疗程短的目的，但盲目加大用药剂量，不科学、不规律，依从性也较差。所以为了提高用药剂量的准确性，做到安全用药，迫切需要针对肠道菌群失调研究更为安全、有效的剂量范围，指导临床用药。

从发明专利92113318.9和201010578718.0公开的数据来看，目前地衣芽孢杆菌CMCC63516（CGMCC No.0183）菌粉的活菌数均较低，一般在250-530亿/g，另外，按发明专利92113318.9和201010578718.0公开的以无水碳酸钙作为稀释剂制备的菌粉，其流动性较差（休止角为：45.0°），因其在现有的10亿/g的地衣芽孢杆菌活菌制剂中添加量有限，还未影响制剂的工业化生产，但如果添加量大于产品的15%，就会明显降低制剂产品整体的流动性，较难实现工业化生产，所以过去这种以无水碳酸钙作为稀释剂制备地衣芽孢杆菌菌粉的方法已经不能适用本发明所涵盖的高剂量范围。

另外，以往的研究过多的关注每批发酵液菌泥的产量，但这解决不了单位质量菌粉中活菌含量不高的现状，满足不了使用少量的菌粉既可调配高剂量、高活菌数成品的目标，如何在保证菌泥产量的情况下，提升单位质量菌泥中的芽孢活菌数，已成为制约高剂量地衣芽孢杆菌活菌制剂开发的关键问题。因此，研制开发一种高剂量地衣芽孢杆菌活菌组合物及其制备方法和用途一直是亟待解决的课题。

发明内容