[发明专利]新城疫病毒株rLX/H9HA及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及应用反向遗传技术，拯救一株以新城疫病毒为载体表达H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组疫苗株rLX/H9HA，用于研制疫苗。

背景技术

反向遗传操作技术(Reverse genetics manipulation technique)是指将RNA病毒基因组RNA逆转录成cDNA，在体外通过采用基因突变、基因插入、基因敲除、基因置换等方法人为构建新的具有感染性的病毒，以研究病毒的基因组结构及功能和病毒宿主之间的相互作用等[Conzelmann KK.Reverse genetics of mononegavirales.Curr Top Microbiol Immunol.2004.283:1-41.]，也叫全长感染性cDNA克隆技术，又常被称为“病毒拯救”。解决了RNA病毒基因组难以操作这一难题，同时为新型疫苗的研发提供了新的思路[Nakaya T,et al.,Recombinant Newcastle disease virus as a vaccine vector.Journal of Virology,2001.75(23):p.11868-73.]。

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是单股、不分节段的负链RNA病毒，属于副粘病毒科成员。按照标准的致病性指标可以将病毒分为速发型(强毒)、中发型(中等毒力)和缓发型(弱毒)。基因组长度大约15kb，其结构为3’-leader-NP-P-M-F-HN-L-trailer-5’，依次编码6种结构蛋白：核衣壳蛋白（Nucleocapsidprotein,NP）、磷蛋白（Phosphoprotein,P）、基质蛋白（Matrix protein,M）、融合蛋白（Fusion protein,F）、血凝素-神经

氨酸酶蛋白（Heamagglutinin-Neuraminidase protein，HN）和大分子蛋白（Large protein,L）。

禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)是禽流感(Avian influenza,A I)的病原体，分类上属于正黏病毒科(Orthomyxovoridae)，A型流感病毒属。病毒基因组由8个单股负链的RNA片段组成，各自编码功能性蛋白，分别为PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、M和NS基因。一般呈球形，直径80nm~120nm，有囊膜，囊膜表面主要有2种糖蛋白纤突，即血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)，迄今已发现16种HA亚型和9种NA亚型。禽流感病毒对宿主的致病性是由多个基因决定的，其中HA基因及其编码的蛋白尤为重要，在病毒吸附及穿膜过程中起着关键作用，是重要的表面抗原，它刺激机体产生中和抗体，可中和病毒的感染。

H9N2亚型禽流感病毒是危害当前养禽业的重要病原之一，广泛存在于家禽中，虽然表现为低致病性，但具有一些独有的发病特点，主要表现为高感染率、高发病率、低死亡率，多引起雏鸡和育成鸡的隐性感染和产蛋鸡的产蛋下降且产蛋率难以恢复，对养禽业造成了严重的危害，并具有重要的公共卫生意义。