[发明专利]一种荧光检测二价铜离子的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及二价铜离子的检测分析技术，具体属于一种基于1,8-二氨基萘（DAN）荧光定量检测Cu²⁺的方法。

背景技术：

作为酶的辅因子，信号使者，铜在生物体系中扮演着许多重要的角色。但高浓度的游离的二价铜离子会产生有害的效应，包括氧化损伤或引起蛋白质错误折叠致使许多神经变性疾病，神经性病变包括门克斯和威尔逊疾病、阿尔茨海默氏症、肌萎缩性侧索硬化症、朊毒体病。尤其是，在高浓度的二价铜离子存在下，由于在酶催化反应中铜离子取代其他金属离子作为辅因子，短期接触能引起胃肠紊乱；长期接触，会引起肝或肾不适。监测生理过程中二价铜离子的浓度和亚细胞分布的生理过程中铜的浓度，大大有助于理解它的化合物生理功能和致病原理。同时，铜离子已经被认定为一种环境污染物，并引起人们的关注。准确检测二价铜离子，在环境和生物分析等领域有重要意义。而发展高选择性、高灵敏度的二价铜离子的检测方法仍是一个挑战性的任务。

发明内容：

本发明的目的是提供一种低成本、高灵敏、高选择性、在水相中荧光检测二价铜离子的方法。

本发明将商业可得的1,8-二氨基萘作为荧光试剂，在检测二价铜离子中应用。1,8-二氨基萘的结构式为：

本发明提供的一种检测二价铜离子的方法，步骤为：

（1）、配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的DAN乙醇溶液；

（2）、按体积比2000:1将HEPES缓冲溶液和DAN乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入,435nm的荧光强度逐渐减弱；

（3）、用蒸馏水配制2mM的Cu²⁺溶液，把2mL的HEPES缓冲溶液和1μL的DAN乙醇溶液加到荧光比色皿中，逐渐加入Cu²⁺溶液的体积为0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5uL，同时在荧光光谱仪上测定435nm的对应的荧光强度F为529、490、469、422、400、373、335、305、236，以Cu²⁺浓度为横坐标，以相对荧光强度F₀-F(F₀﹦570)为纵坐标绘制图，得到Cu²⁺浓度的工作曲线；线性回归方程为：F₀-F=10.9+64.0c(c的单位为10^-6mol/L)；

（4）、将HEPES缓冲溶液2000uL和1,8-二氨基萘乙醇溶液1uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取V ul待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤（3）的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样=2000uL×c×10^-6/VuL,即可求得Cu²⁺的浓度。

经实验证明，其它金属离子不干扰体系对Cu²⁺的测定。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：1、检测体系成本低廉，试剂商业可得且廉价；2、本发明的检测方法，对Cu²⁺显示了高的灵敏性和选择性；3、检测过程在水相中进行；4、检测手段简单，只需要借荧光光谱仪；5、本发明可用于细胞成像。

附图说明：

图1实施例1DAN与Cu²⁺作用的荧光发射图。

图2实施例2DAN与各种阳离子作用的荧光柱状图及颜色对照图。

图3实施例3工作曲线图。

图4实施例4细胞成像图。

具体实施方式：

实施例1

配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的DAN溶液；把2mL的HEPES缓冲溶液及1μL的DAN乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，取Cu²⁺的溶液，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在荧光分光光度仪上检测，随着Cu²⁺的加入，435nm处荧光强度逐渐减弱。荧光发射图见图1。

实施例2