[发明专利]一种重组人3型腺病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种以人3型腺病毒(HAdv3)为载体的人3型、7型腺病毒双价疫苗候选株及其制备方法。人3型腺病毒(HAdv3)衣壳中包含HAdv3六邻体和HAdv7六邻体两种六邻体。在人3型腺病毒基因组E3区插入了HAdv7六邻体蛋白表达框，在体外细胞中拯救包装得到一种六邻体嵌合型的重组腺病毒，其衣壳中包含HAdv3六邻体和HAdv7六邻体两种六邻体。该疫苗候选株灭活或不灭活都可以诱导出同时抗HAdv3和抗HAdv7的中和作用抗体，利用该疫苗候选株可制备预防HAdv3和HAdv7感染的双价疫苗。

技术领域

本发明属于重组病毒基因工程技术领域，具体涉及一种以人3型腺病毒(HAdv3)为载体的人3型、7型腺病毒双价疫苗候选株及其制备方法。

背景技术

人腺病毒(Adenovirus)是1953年从急性呼吸道疾病病人身上分离、鉴定出来的，是一类主要感染人呼吸道和消化道的病原体。到目前为止，人类已经发现了6个种属52种不同血清型的腺病毒；其中约有1/3能引起如急性呼吸道感染、流行性角膜炎、急性出血性结膜炎、咽结膜炎、急性咽炎、膀胱炎、婴幼儿致死性肺炎等疾病；患者主要是婴幼儿及体弱人群。在我国，5岁以下儿童急性呼吸道疾病中约有5％是由腺病毒引起的；其中，腺病毒引起的肺炎尤为严重，是婴幼儿肺炎发病率中仅次于呼吸道合胞病毒肺炎的一种病毒性肺炎；严重的腺病毒肺炎不仅可以引起心力衰竭、呼吸衰竭，还可以引起肺外受累，如脑炎、肝损害、心肌炎或心肌损害等，甚至导致死亡。腺病毒流行范围广，传播速度快，近年来在多个国家和地区爆发和流行，给人们的公共卫生安全带来了极大的威胁。在我国，3型和7型腺病毒是引起严重呼吸道感染的主要的两种腺病毒。

腺病毒致病的广泛性和危害的严重性使得腺病毒的防治显得十分重要，接种腺病毒疫苗是预防腺病毒感染最有效的方法之一。但由于腺病毒产生的中和抗体只能中和同型腺病毒的感染，不同型别腺病毒抗体之间无交叉保护作用。在我国，腺病毒疫苗的临床使用还是一片空白。从我国近年来多次爆发腺病毒疫情来看，自主研发腺病毒疫苗十分必要。若研制出一种能同时预防几种型别的腺病毒感染的疫苗对于降低腺病毒感染率将非常有价值。而不同型别腺病毒简单混合的多价疫苗可能体内重组产生高致病的病毒而受到限制。

腺病毒颗粒是一个二十面体的对称结构，壳体由12个位于顶角的五邻体基座和纤维蛋白，240个非顶角颗粒的六邻体(hexon)以及结构辅助蛋白多肽构成。六邻体是三聚体结构，包括是腺病毒颗粒中最丰富的免疫原，是腺病毒最主要的诱导中和性抗体的抗原。不同型别腺病毒的六邻体蛋白的氨基酸序列有高达78-95％的同源性，其区别主要集中在7个高变区(HVRs)，这些高变区暴露于病毒壳体表面，不涉及六邻体单体间的相互作用，也不与其它的腺病毒蛋白相互作用。人3型腺病毒和人7型腺病毒六邻体间相似性高达95％，其区别仅存在于5个表面暴露区。

发明内容

为克服上述技术缺陷，本发明提供一种重组人3型腺病毒及其制备方法和应用。

本发明的一种重组人3型腺病毒由嵌合型人3型腺病毒衣壳和重组人3型腺病毒基因组构成，所述HAdv7六邻体蛋白表达框插入位点为所述人3型腺病毒的基因组E3区，所述重组人3型腺病毒嵌合型衣壳中包括HAdv3和HAdv7两种型别的六邻体。

本发明还提供一种衣壳嵌合型重组人3型腺病毒颗粒，其特征在于，病毒颗粒衣壳中包括HAdv3和HAdv7两种型别的六邻体。

本发明还提供了一种人3型腺病毒-人7型腺病毒的双价疫苗候选株，所述双价疫苗候选株含有上述重组人3型腺病毒。

本发明还提供了一种制备上述重组人3型腺病毒的方法，包括如下步骤：

将HAdv7六邻体蛋白全基因、CMV启动子和SV40polyA插入重组人3型腺病毒基因组中，所述插入区为E3区。