[发明专利]植物基因组DNA快速提取装置及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域中转基因产品核酸的提取检测技术，具体涉及一种植物基因组DNA快速提取装置及其检测方法。

背景技术

随着现代生物技术的迅速发展，使得基因工程技术在农业生产领域应用更加地广泛，自1996年转基因作物被首次批准商业化种植至今，其种植面积以8％的速度持续增长。目前已达到1.6亿公顷，相比于1996年增长了94倍之多。种植面积前十名的国家都各自超过了一百万公顷。经统计，共有29个国家种植有转基因作物，其中19个发展中国家的种植面积差不多为总面积的一半。发展中国家种植面积的增长百分比(11％)远远超过了发达国家(5％)。目前，全球已有欧盟27国及澳大利亚、新西兰、巴西、中国等50多个国家和地区对转基因产品进行标识管理。

根据转基因生物及其产品的特征，转基因检测方法可分为核酸和蛋白质检测两大类。由于核酸，特别是DNA的稳定性，在加工过程中不易降解.基于DNA水平的检测技术方法已成为转基因生物的主要检测方法。PCR方法是目前最准确的应用于转基因植物检测的方法，可用于单重、多重筛选检测、品系鉴定，从种子或叶子到终产品一般不受材料加工程度的影响，也是目前大多数转基因目标高通量检测中目标扩增方法之一。PCR方法按性质可分为定性和定量PCR两种检测方法，定性PCR技术主要用于对转基因植物进行筛选和/或鉴定检测，可实现对单个或多个DNA目标(如：复合PCR技术)的检测。定量PCR检测的目的是估算样本中的原始模板数，通过一定循环次数的PCR扩增后，用PCR产物量来判断样品的原始模板数。而随着分子生物学的飞速发展以及生物物理技术的大量应用.新的核酸扩增技术也不断涌现，以环介导的等温扩增技术为代表的新技术不但实现了快速检测，更使现场和田间检测这一难题成为可能。而目前为止能与之相结合的核酸提取技术都过于繁琐，费时费力，很难运用于现场快速检测系统。

目前，转基因产品基因组的提取方法一般是CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法、SDS碱裂解法、离心柱法等。无论是哪种方法，都用到了大量贵重、笨拙的仪器，如离心机，水浴锅等，这就给现场田间检测带来了诸多不便。而在检测扩增的过程中，基于PCR方法不可避免的要使用精密的PCR仪，且结果需要凝胶电泳来观察。整个过程中花费时间4-5小时(DNA提取1个小时到2个小时，PCR检测2～3个小时，电泳分析1小时)。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术方法的不足，提供一种适合于现场田间检测和实验室常规检测的植物基因组核酸DNA快速提取装置及其检测方法。本发明运用气压法代替了离心机等大型仪器，用二氧化硅膜来结合核酸分子，设计了简单有效的植物基因组DNA快速提取装置，该装置是由提取柱，改装后的注射器以及离心管组成，整个装置成本很低，使用非常方便且不需要笨重的辅助设备，其能对常规的作物种子和叶子进行植物基因组DNA的提取，只需要15分钟的时间，便能得到无降解，纯度高，对PCR无抑制作用的DNA。将这一装置与环状介导的等温扩增方法相结合进行快速检测转基因产品的方法，该方法具有很高的灵敏度，解决了转基因产品现场快速检测的难题，经试验验证其对两种转基因大豆的检测灵敏度能达到5个拷贝。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

第一方面，本发明涉及一种植物基因组DNA快速提取装置，所述植物基因组DNA快速提取装置由若干底部装有海绵的注射器，提取柱子以及若干离心管组成；所述提取柱子的上端部可与注射器的注射口密封连接，所述提取柱子的下端部可与离心管连接，所述提取柱子的下端部连接有装载封盖，所述装载封盖装载二氧化硅膜并卡嵌在所述提取柱子的下端部内侧，所述装载封盖的中心设有通孔。

优选地，所述提取柱子的下端部外侧设有卡箍，所述离心管由卡箍卡合连接在提取柱子上。

优选地，所述提取柱子的上端部为上宽下窄的柱状结构，所述上端部的宽部靠近注射器。

进一步优选地，所述上端部的窄部的内径等于所述注射器注射口的外径。

优选地，所述装载封盖为空心圆柱状结构，所述装载封盖的底部向外延伸有凸部，所述凸部的外表面与所述下端部的内表面紧密配合。

进一步优选地，所述凸部的外径等于所述下端部的内径。

第二方面，本发明还涉及一种现场快速检测植物基因组DNA的方法，包括如下步骤：

A、用前述的植物基因组DNA快速提取装置提取植物DNA；

B、用环介导等温扩增方法对步骤A中提取到的植物DNA进行检测。