[发明专利]一种鱼类NK-lysin效应因子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种鱼类NK-lysin效应因子及其应用。

背景技术

细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs)和自然杀伤细胞（natural killer cell，NKC)是细胞免疫的主要效应细胞。这些细胞在受到刺激时分泌一系列引起靶细胞凋亡和杀伤的效应因子，其中一种即为NK-lysin。NK-lysin是saposin家族的一员，具有典型的saposin结构域。

在哺乳动物中，NK-lysin是一种抗菌肽，具有广谱的抑菌活性。因此，

NK-lysin在细菌性疾病的防治中有良好的应用前景。NK-lysin目前只在五种硬骨鱼中发现，但其功能、应用等尚待研究。

发明内容

本发明目的在于提供一种NK-lysin效应因子及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种鱼类NK-lysin效应因子，NK-lysin为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。

NK-l ysin效应因子的制备方法，

以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物纯化后与质粒pIRES2-EGFP用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌，筛选转化子提取质粒，即为含SEQ ID No.1中氨基酸序列所示的质粒pCNK1；所述F1为5’-GATATCATGAACAAATCTCCAATCC-3’；R1为5’-GATATCGTTGTTTGGATAGAAGAGGA-3’。

NK-lysin效应因子的应用，所述NK-lysin效应因子用于制备抗细菌或病毒的药物。将含SEQ ID No.1中氨基酸序列所示的质粒pCNK1在PBS中稀释至200ug/ml。

本发明具有如下优点：本发明的NK-lys in表达质粒注射鱼类后能够明显提高鱼类的抗病毒和抗细菌感染能力。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法（Sambrook and Russell:Molecular Cloning:A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001）。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

本发明的NK-lysin为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ ID No.1为：

MNKSPILLFCILAACSVWSVHGKSQEMNIDDEEPAEVELPVEAKPPGLCWGCKWALNKVKKAMTQKETYEKVKAR LIKICNKIGFLKSRCHKFVITHLDELVEELSTTDDVKTICVNVKACNPKEPSHLLFYPNN

（a）序列特征：

●长度：135（有效作用区域47－121）

●类型：氨基酸序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：蛋白质

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：半滑舌鳎

结构特点：该蛋白预期含有一个Saposin B功能域（氨基酸47－121）。

实施例2

NK-lysin表达质粒pCNK1的构建：