[发明专利]一种人胚肺成纤维二倍体细胞株SLF-1及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种人胚肺成纤维二倍体细胞SLF-1与应用。 

背景技术

人二倍体细胞来源于正常人组织，可以进行体外有限寿命的传代培养，保留原体内的细胞特征，具有正常人二倍体染色体数目，核型正常，无肿瘤原性。作为疫苗生产用细胞基质，人二倍体细胞能够解决原代细胞和传代细胞系的很多问题，通过全面检定可以建立质量均一、数量充足的细胞库；无内外源因子污染；无致肿瘤性风险，故无须考虑细胞蛋白和DNA残留量。人二倍体细胞与人抗原性一致，能将疫苗过敏反应的可能性降到最低。尤其对于青少年和婴幼儿的计划免疫，其能大大提高疫苗的安全性。目前国际上用于疫苗生产的人二倍体细胞主要有WI-38和MRC-5，其均为上世纪60年代分离，目前欧美等发达国家市场上使用这两种细胞生产的疫苗产品主要有冻干人用狂犬病疫苗、麻疹减毒活疫苗、风疹减毒活疫苗、甲肝灭活疫苗、水痘减毒活疫苗和脊髓灰质炎灭活疫苗等，由于MRC-5细胞的生长性状和病毒敏感性均优于WI-38，故其拥有更广泛的应用。国内用于疫苗生产的人二倍体细胞主要有2BS和KMB-17，其均为上世纪70年代分离，国内市场上使用这两种细胞生产的疫苗产品主要有麻疹减毒活疫苗风疹减毒活疫苗、甲肝减毒活疫苗、甲肝灭活疫苗、水痘减毒活疫苗，脊髓灰质炎减毒活疫苗等。以人二倍体细胞为基质生产的疫苗产品近40年的使用经验充分证明了人二倍体细胞作为疫苗生产用细胞基质具备良好的安全性和有效性。在疫苗产品安全性越来越受到关注的今天，人二倍体细胞 以其自身的优势成为疫苗生产用细胞基质的重要选择之一。 

人二倍体细胞也存在一些缺点阻碍其在疫苗生产中的广泛应用，主要是疫苗生产成本较高，具体表现在细胞繁殖代次有限，培养条件要求较高，生产时间较长，培养规模难于放大，生产时病毒产量较低。目前国内外使用的人二倍体细胞存在的主要问题体现在两个方面： 

一是缺乏较早代次的原始细胞种子，细胞极限寿命较短，细胞培养难度大，培养成本高且病毒敏感性不理想。作为国际认可用于疫苗生产的人二倍体细胞株MRC-5和WI-38来说，其均为上世纪60年代分离培养制得，两株细胞的极限寿命均为50代左右，故其生产使用代次应控制在33代以内。目前能从美国菌种保藏中心（ATCC）购买到的MRC-5细胞最早代次为10代，因此在18代间隔内，要制备工作细胞库并用于生产，细胞很难增殖到较大的生产规模，也正因为细胞代次较高，细胞培养的难度加大，细胞数量直接影响病毒的活性和产量；培养成本增加直接影响产品的售价。以巴斯德公司的冻干狂犬病疫苗为例，其拥有人二倍体细胞基质和vero细胞基质的两种疫苗产品。由于MRC-5细胞的培养成本高，病毒产量少导致疫苗价格昂贵，因此安全性更高的人二倍体细胞基质的狂犬病疫苗只在欧美等发达国家内销售。由此可见，拥有原始细胞库从而能够有较多使用代次的细胞对于疫苗的生产来说至关重要。 

另一个问题是细胞的使用权限和范围的限制。MRC-5细胞虽然是国际认可的疫苗生产用人二倍体细胞株，但从ATCC购买来的细胞一般仅可以用于研究，如果用于生产则需要支付高昂的国际生产许可费，即使通过WHO获得可用于生产的该细胞株数量也是非常有限的，严重阻碍更多品种疫苗的开发和生产。国内主要用于疫苗生产的两株人二倍体细胞2BS和KMB-17也有各自的使用权限，且 未获得国际认可，使用范围受到限制。 

因此，现有的这些人二倍体细胞株已经无法满足目前疫苗生产的需求。近几十年科技的发展使得细胞培养和检定技术有了很大的进步。本发明涉及开发制备遗传背景清晰、生长状态良好并对多种病毒敏感的人二倍体细胞株作为生产疫苗的细胞基质，不仅可以提高疫苗的质量、降低生产成本，还可以快速推动以新人二倍体细胞为基质的新型疫苗的开发和产业化进程。 

目前由人二倍体细胞进行规模化生产的病毒种类包括水痘带状疱疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、甲肝病毒、狂犬病毒和EV71病毒等，但是由于目前使用的多种人二倍体细胞存在所述的问题，因此，发明一种生物特性良好、病毒适应范围广范、生产病毒较容易的人二倍体细胞基质成为疫苗生产工艺提升的迫切需求。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种人胚肺成纤维二倍体细胞株；本发明的另一目的在于提供该二倍体细胞株的应用。