[发明专利]用于检测副溶血性弧菌的试纸条及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的，本发明涉及用于检测副溶血性弧菌的试纸条及其用途，尤其是涉及海产品中副溶血性弧菌的快速检测。

背景技术

副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus，VP)是一种常见的食源性致病菌，主要存在于墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇等海产品中，其引起的食物中毒临床上以腹痛、呕吐、腹泻等为主要症状。该病多在夏秋季发生于沿海地区，造成集体发病。近年来由于海鲜空运，内地城市病例也渐增多，特别是在沿海地区，发病起数和涉及的人数较我国其他地区更为严重，必须建立可靠的快速检测方法，长期监控水产品中副溶血性弧菌的污染状况。传统的微生物培养鉴定方法是实验室常用的检测方法，但耗时长，操作繁琐等缺点不能满足快速检测副溶血性弧菌的要求。尽管PCR、DNA探针等技术已经广泛应用于副溶血性弧菌的检测中，但基质效应对检测结果干扰较大。近年来，以免疫学反应为基础的酶联免疫分析方法在微生物检测方面发展迅速，尤其是免疫层析方法更体现了方法的快速性。然而，目前用于检测副溶血性弧菌的手段仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够快速、简便、灵敏、特异、价格低廉的试纸条。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种用于检测副溶血性弧菌的试纸条。包括：片状基材，所述片状基材具有第一端和第二端，并且在所述片状基材的上表面，沿第一端至第二端的方向依次形成有样品垫、炭黑垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；检测线，所述检测线形成在所述硝酸纤维素膜上接近所述片状基材第一端的一侧；质控线，所述质控线形成在所述硝酸纤维素膜上接近所述片状基材第二端的一侧，其中，所述炭黑垫由炭黑颗粒形成，其中所述炭黑颗粒的至少一部分包被有抗副溶血性弧菌单克隆抗体；所述检测线由附着于所述硝酸纤维素膜上的抗副溶血性弧菌多克隆抗体形成；以及所述质控线由附着于所述硝酸纤维素膜上的羊抗鼠抗体形成。发明人发现，通过采用炭黑颗粒能够显著提高试纸条的灵敏度碳黑试纸条，使用方便、便于携带、结果直观、保存简单，检测结果只需10分钟，检测下限为1×10³cfu/mL。这为基层检测副溶血性弧菌提供了方便，相比较传统方法检测而言，该试纸条节省了大量的人力和财力，具有极大的推广和使用价值。在研究过程中，发明人发现，采用碳黑颗粒作为抗副溶血性弧菌单克隆抗体标记物时，试纸条的灵敏度达到1×10³cfu/mL，而采用传统的胶体金颗粒作为抗副溶血性弧菌单克隆抗体的标记物时，试纸条的灵敏度只有1×10⁴cfu/mL。相比之下，采用炭黑颗粒比采用胶体金作为标记物，试纸条的灵敏度高出一个数量级。另外，根据本发明的实施例的用于检测副溶血性弧菌的试纸条还可以具有下列有益效果至少之一：(1)灵敏度高，少量的菌就能检测；(2)特异性强；(3)稳定性好；(4)操作简单，无需仪器设备；(5)易于运输储存。

根据本发明的实施例，用于形成片状基材的材料并不受特别限制，优选，所述片状基材由PVC形成。由此，可以进一步提高用于检测副溶血性弧菌的试纸条的检测效率。

根据本发明的实施例，所述炭黑颗粒是通过下列步骤制备的：将甲苯在空气中燃烧后，残渣收集在玻璃烧瓶中，加入甲苯并加热煮沸冷却至常温后过滤，得到滤渣；以及将所述滤渣在260摄氏度下进行热处理12小时，以便获得所述炭黑颗粒。由此，可以进一步提高用于检测副溶血性弧菌的试纸条的检测效率。

根据本发明的实施例，将所述滤渣在260摄氏度下进行热处理12小时。由此，可以进一步提高用于检测副溶血性弧菌的试纸条的检测效率。

根据本发明的实施例，在对所述滤渣进行热处理之前，利用有机溶剂对所述滤渣进行洗涤并真空干燥，其中，所述有机溶剂为选自甲苯、二甲基甲酰胺和己烷的至少一种。由此，可以进一步提高用于检测副溶血性弧菌的试纸条的检测效率。

根据本发明的实施例，所述抗副溶血性弧菌单克隆抗体是通过下列步骤包被于所述炭黑颗粒上的：将所述炭黑颗粒与所述抗副溶血性单克隆抗体混合，以便获得第一混合物；以及向所述第一混合物中添加戊二醛，以便使得所述抗副溶血性单克隆抗体与所述炭黑颗粒发生耦联。由此，可以进一步提高用于检测副溶血性弧菌的试纸条的检测效率。