[发明专利]一种烟草中2，4，5-T残留量的测定方法

权利要求书

1.测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）提取烟草中的目标物

称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入氘代内标、乙腈和甲酸，涡漩混合振荡，放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振荡后离心，移取上清液于新的离心管中；

2）N-丙基乙二胺纯化

在盛有上清液的离心管中加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测；

3）标准储备液和标准工作液的配制

用乙腈配置2，4，5-T标准储备液，储存于不透明玻璃瓶中，-20℃保存，

用乙腈准确配置2，4，5-T-d₂氘带内标标准储备液，储存于不透明玻璃瓶中，-20℃保存，使用前将其恢复到室温，

用国际烟草科学研究合作中心空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的2，4，5-T标准工作溶液；（4）液相色谱-串联质谱测定：吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的2，4，5-T标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中2，4，5-T含量。

2.根据权利要求1所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，所述烟叶的重量为2g。

3.根据权利要求2所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤1）中所述冷冻时间为10min，冷冻温度为-18至-15℃。

4.根据权利要求3所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤1）中提取过程依次加入的超纯水、氘代内标、乙腈和甲酸的体积分别为10mL，20L，10mL和200L，速率涡旋振荡1min；离心管在-10℃条件下保持10min；依次加入的无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠的质量分别为4g，1g，1g和0.5g；然后漩涡混合振荡的速率为2000rpm，振荡时间为2min，离心时间为10min。

5.根据权利要求3所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤2）中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂的质量为150mg和25mg。

6.根据权利要求3所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤2）中移取滤液体积为200L，加入乙腈和超纯水的体积为100L和700L。

7.根据权利要求3所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤4）中选取70%体积分数0.05%的甲酸水和30%乙腈初始流动相体系，分析时间为4min，进样量为10μL。

8.根据权利要求7所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤4）中梯度洗脱条件为：0~2min，70%A~10%A；2~3.5min，10%A~10%A；3.5~3.51min，10%A~70%A；3.51~4.00min，70%A~70%A；流动相流速为0.7mL/min。

9.根据权利要求8所述的测定烟草中2，4，5-T残留量的方法，其特征在于，步骤4）中串联质谱检测器的条件：ESI-，喷雾电压：2.6kV，雾化气流量：800L/Hr；锥孔气流量50L/Hr，离子化温度350℃；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，负离子MRM模式采集。