[发明专利]一种补加生物素的生产谷氨酸的发酵方法

权利要求书

1.一种补加生物素的生产谷氨酸的发酵方法，其特征在于：步骤包括：以生物素缺陷型菌株为生产菌株，控制发酵培养基中初始生物素的含量，在发酵过程中补加青霉素和生物素。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于：步骤如下：

(1)将OD值为0.9~1.2的生物素缺陷型菌株的种子培养液按种子培养液：发酵培养基的体积比为0.05~0.2：1的比例接入发酵培养基中，发酵培养基中初始生物素含量为5μg/L~65μg/L；发酵温度控制在32~40℃；补充氮源至pH为6.5~7.5，控制通气量为0.1~0.5vvm；

(2)在发酵培养至6~24h的期间先补加青霉素，然后补加生物素；发酵培养至8~14h后，补加葡萄糖至发酵液中终质量浓度为10~140g/L；

(3)继续发酵培养至26~32h后发酵结束，即得谷氨酸。

3.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述种子培养液的活化方法如下：

(1)从斜面上接生物素缺陷型菌株于种子培养基中，30~35℃振荡培养6~10h，OD值为0.6~1.0，得菌株活化液；

(2)将菌株活化液按体积比为0.05~0.2：1的比例接入种子培养基中，30~35℃振荡培养6~10h，得种子培养液；

其中，所述种子培养基为：葡萄糖 20~35g/L，玉米浆 10~20g/L，糖蜜5~15 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5~0.9g/L，KCl 1.0~1.5g/L，MnSO₄ 0.00025~0.0015g/L，V_B1 0.0001~0.0005g/L，Na₂HPO₄  1.5~2.5g/L，纯生物素0~30μg/L。

4.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述步骤⑵中补加青霉素为在发酵培养至6~24h的期间一次添加青霉素，使发酵培养基中青霉素含量为4~25个单位/毫升。

5.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述步骤⑵中补加青霉素为在发酵培养6~24h的期间2~4次添加青霉素，每次使发酵培养基中青霉素含量为4~25个单位/毫升。

6.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述步骤⑵中补加生物素为在发酵培养6~24h的期间一次补加生物素，使发酵培养基中生物素含量达到50~500 μg/L。

7.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述步骤⑵中补加生物素为在发酵培养6~24h的期间连续补加生物素，使发酵培养基中生物素含量为3~30 μg/L。

8.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述步骤⑴中氮源为氨水或液氨；所述碳源为葡萄糖。

9.根据权利要求1至8任一项所述的发酵方法，其特征在于：所述生物素来源于玉米浆、菌体蛋白、糖蜜、质量含量大于95%的纯生物素中的一种或两种以上的混合物。

10.根据权利要求2至8任一项所述的发酵方法，其特征在于：所述发酵培养基为：葡萄糖 120~150g/L，玉米浆 1.0~2.5g/L，糖蜜0.5~1.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5~0.9g/L，KCl 1.5~2.5g/L，MnSO₄0.003~0.006g/L，V_B1 0.0005~0.0008g/L，Na₂HPO₄ 1.5~3.5g/L，纯生物素0~20μg/L，消泡剂 0.2~0.4g/L；

其中，玉米浆中玉米浆固形物含量的质量分数为30-50%，生物素质量含量为600~800μg/L；糖蜜中糖蜜固形物含量的质量分数为30-60%，生物素质量含量为2000~3000μg/L。