[发明专利]一种银杏幼苗雌雄株的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物雌雄株的鉴别方法，特别涉及一种针对银杏雌雄株早期的鉴别方法。

背景技术

自然界大部分植物是雌雄同株，而银杏等少数树种却是雌雄异株；雄银杏只开花不结果，雌银杏才会结果；即使将雌银杏的枝条嫁接到雄银杏树上，也只有这根枝条结果。一般从外观上很难区分银杏树是雄是雌。两者在树形上只有细微差别，雌银杏的树冠向两边扩张，雄银杏的树冠是拼命往上长，只有业内专业人员能区分雌雄株。雄银杏由于不结果的原因，被砍伐的比较多，所以目前自然界中，银杏树是雌多、雄少。

银杏雌雄株的生长习性、形态、特征与用途各不相同，及早并正确地区分雌雄株， 在生产实践上具有重要意义。银杏集药用、食用、材用和观赏于一身，具有特殊的经济价值和重要的科学研究价值。近几年来在我国发展迅速，种植规模日渐扩大，特别是在城市园林绿化工程中被广泛使用。银杏为雌雄异株植物，实生树定植后需20-25年才能开花结果，分出雌雄。因银杏种子在成熟时具有一种特殊的臭味，落果腐烂污染城市及行人，所以作为绿化树种只需雄株，不需要以生产白果为目的的雌株。因此，银杏雌雄株性别的早期鉴别不仅具有理论意义，而且具有重要的实用价值。

在银杏幼苗幼树期，可以采用形态鉴别法、生理生化指标法、同工酶谱和染色体核型鉴定法等方法。虽然凭外部形态特征来鉴别银杏性别，方法简单易行，但要等植株达到一定年龄(大约10年以上)才能区分雌雄株，而且银杏雌雄株在苗期形态指标差距不大，缺少数字化和图谱的明确标准，因而银杏苗期形态鉴定存在一定难度。银杏的生理生化指标大多力求从不同侧面寻找已知性别的成年植株之间进行测定，表现出一定的差异性，尽管有些差异在苗期也有反映，但多表现在量的方面，而且随水分、养分、CO₂浓度、温度、光照和干扰水平等的不同而有所不同。同工酶谱和染色体核型鉴定法准确率较高，但是酶带差异不一定是雌雄性别造成的，有可能与其他性状的变异有关，诸如叶片性状等，这些变异在银杏雌雄株内普遍存在，且由于在早期鉴定时，可选择的酶种类较少，显色的酶带不多，有时并不能区分开雌雄株。而且操作工序复杂，需要CTAB、PVP、Tris-HCl、酚、氯仿、TE、溴化乙锭等药品，药品昂贵，毒性大，还要引物和PCR仪，仪器设备要求高，要有较高专业知识的人操作，普通实验室难以进行。所以以上这些方法均不宜在城市园林绿化工程中推广。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种银杏雌雄株早期的简单易行的鉴别方法，实验药品用量少，仪器设备简单，在园林公司或苗圃，普通工人就可以进行操作，将本发明的技术应用在城市园林绿化工程中，既简便又有效，具有较高的应用价值。

本发明采用的技术方案是：一种银杏幼苗雌雄株的鉴别方法，包括如下步骤：

（一）材料的准备：取银杏幼苗叶片，洗净，吸干水分，备用；

（二）检测：

1)        称取0.5-1.0 g银杏幼苗叶片，剪碎；

2)        加入4-5 ml磷酸缓冲液，冰浴研磨呈匀浆；

3)        室温下浸提1-1.5 h；

4)        浸提液在5000 rpm 离心5 min；

5)        取上清液2 ml，加入0.1%溴麝香草酚蓝4-5ml，混匀；

6)        置于30℃温度下，观察浸提液颜色变化所需的时间，并每隔15min记录银杏浸提液的颜色变化。

上述的银杏幼苗雌雄株的鉴别方法，所述的磷酸缓冲液的pH为6.6。优选的，pH为6.6的磷酸缓冲液的制备方法如下：将NaH₂PO₄·H₂O 27.8g加水配成1000ml溶液，Na₂HPO₄·7H₂O 53.65g加水配成1000ml溶液；取62.5ml NaH₂PO₄·H₂O溶液和37.5ml Na₂HPO₄·7H₂O溶液混合，加水稀释至200ml。

上述的银杏幼苗雌雄株的鉴别方法，还包括如下步骤：根据浸提液颜色变化判定雌雄株，具体方法为：

1)        银杏浸提液在加入溴麝香草酚蓝液后均呈蓝绿色，随着时间的不断延长，在10min内由蓝绿色转至绿色，银杏雌雄浸提液变化没有差异；