[发明专利]对维生素C的发酵生产

权利要求书

1.对维生素C进行发酵生产的方法，其中，在允许从能够从D-葡萄糖或D-山梨糖醇代谢途径获得的碳源直接生产维生素C的合适培养条件下，培养宿主细胞，并且，其中，所述宿主细胞的基因组被包含下述多核苷酸的DNA序列进行了遗传工程改造：

a）编码根据SEQ ID NO：2的L-山梨糖酮脱氢酶或其活性片段或其衍生物的多核苷酸，以及

b）编码选自下述组的蛋白质的至少一种多核苷酸，所述组由

1）涉及山梨糖/山梨糖醇代谢系统（SMS）的蛋白质；

2）涉及穿过细胞膜的糖转运系统（STS）的蛋白质；

3）涉及呼吸链系统（RCS）的蛋白质；以及

4）显示出与甘露糖-1-磷酸鸟苷酰转移酶/甘露糖-6-磷酸异构酶或肌氨酸氧化酶α亚基或同渗容摩传感器蛋白envZ rp426或转录调控蛋白OmpR或PetP或肽去甲酰酶或天冬酰胺合酶的相似性的蛋白质构成；

以及可选地，从此类细胞或所述培养基分离维生素C。

2.如权利要求1所述的方法，其中，根据1a）的多核苷酸的表达指与SEQ ID NO：1基本相同的多核苷酸序列和/或选自下述组的多核苷酸序列或此类多核苷酸的互补链，所述组由

a）多核苷酸，其包含根据SEQ ID NO：1的核苷酸序列

b）多核苷酸，其包含可使用来自微生物的基因组DNA作为模板，使用根据SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的引物组，通过核酸扩增，例如聚合酶链式反应，获得的核苷酸序列；

c）多核苷酸，其包含编码含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的片段或衍生物的核苷酸序列，或包含编码由（a）或（b）中任何多核苷酸编码的多肽的片段或衍生物的核苷酸序列，其中，在所述衍生物或片段中，一个或多个氨基酸残基较之所述多肽而言被保守取代，并且，所述片段或衍生物具有其副本多肽的活性；

d）多核苷酸，其编码具有L-山梨糖酮脱氢酶活性的多肽，其互补链在严谨条件下能与编码包含根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸杂交，或与（a）至（c）中任一条定义的多核苷酸杂交；

e）多核苷酸，其编码具有L-山梨糖酮脱氢酶活性的多肽，并且，其与编码包含根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸、或与（a）至（c）中任一条定义的多核苷酸至少70%相同，例如85、90或95%相同

构成。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述宿主细胞含有编码STS蛋白的多核苷酸，所述STS蛋白选自糖转运蛋白和/或糖醇转运蛋白构成的组。

4.如权利要求1至3中任意一项所述的方法，其中，所述宿主细胞含有编码RCS蛋白的多核苷酸，所述RCS蛋白选自在辅助因子和辅基的生物合成中发挥作用的蛋白以及作为载体蛋白发挥作用的蛋白构成的组；特别是涉及辅助因子和/或它们的前体，例如FAD，NAD，NADP，PQQ，CoQ10，细胞色素a、b、c、d以及亚铁血红素的生物合成或成熟的蛋白。

5.如权利要求1至4中任意一项所述的方法，其中，所述宿主细胞含有编码RCS蛋白的多核苷酸，所述RCS蛋白选自在作为供体的联苯酚以及相关物质上发挥作用的氧化还原酶[EC1.10]和具有其它受体的氧化还原酶[EC1.1.99]构成的组，特别是醇脱氢酶（受体）[EC1.1.99.8]。

6.如权利要求1至5中任意一项所述的方法，其中，所述宿主细胞含有编码SMS蛋白的多核苷酸，所述SMS蛋白选自氧化还原酶[EC1]构成的组，特别是在供体的CH-OH基团上发挥作用的氧化还原酶[EC1.1]。