[发明专利]一种产青蒿酸基因工程菌的构建方法在审
| 申请号： | 201310048422.1 | 申请日： | 2013-02-07 |
| 公开（公告）号： | CN103981110A | 公开（公告）日： | 2014-08-13 |
| 发明（设计）人： | 魏维;戈梅;孙新强;罗敏玉;肖彩霞;夏兴;盛保伟;金一平 | 申请（专利权）人： | 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司;浙江医药股份有限公司新昌制药厂 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 上海华工专利事务所(普通合伙) 31104 | 代理人： | 应云平 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 青蒿 基因工程 构建 方法 | ||
1.一种产青蒿酸基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A）构建基因表达模块，所述基因表达模块包括青蒿酸生产相关的基因、所述青蒿酸生产相关的基因上游的启动子和所述青蒿酸生产相关的基因下游的终止子；
B）将所述基因表达模块共转化至酿酒酵母中。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A）中所述基因表达模块还包括抗性基因、所述抗性基因上游的启动子和所述抗性基因下游的终止子。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤A）中所述构建基因表达模块包括以下步骤：
A1）通过PCR扩增获得所述青蒿酸生产相关的基因、所述抗性基因片段、所述青蒿酸生产相关的基因上游的启动子片段、所述抗性基因上游的启动子片段、所述青蒿酸生产相关的基因下游的终止子片段和所述抗性基因下游的终止子片段；
A2）以所述青蒿酸生产相关的基因、所述抗性基因片段、所述青蒿酸生产相关的基因上游的启动子片段、所述抗性基因上游的启动子片段、所述青蒿酸生产相关的基因下游的终止子片段和所述抗性基因下游的终止子片段为模板，通过重叠PCR扩增获得基因表达模块。
4.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述步骤A）中所述青蒿酸生产相关的基因为ads、amo和cpr。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述ads、amo和cpr来源于青蒿。
6.如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤A）中所述启动子选自ADH1p、TEF1p、TPI1p和PGK1p。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述启动子来源于酿酒酵母。
8.如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤A）中所述终止子选自TKL1t、ADH1t、ENO2t和TDH2t。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述终止子来源于酿酒酵母。
10.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述抗性基因为ble基因。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述抗性基因来源于pGAPZαA。
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