[发明专利]一种体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法无效
| 申请号： | 201310048466.4 | 申请日： | 2013-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN103266082A | 公开（公告）日： | 2013-08-28 |
| 发明（设计）人： | 陈丽娟;陈银娜 | 申请（专利权）人： | 赛业（广州）生物科技有限公司;赛业（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510663 广东省广州市科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 诱导 胚胎 干细胞 化为 神经元 方法 | ||
1.一种体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A，分离，通过差速贴壁法将MEF与ES进行分离；
步骤B，EB悬浮，加入EB形成液重悬细胞，每个10cm细菌培养皿接种浓度为2-3×106Cells，培养2-4d，每1-2d进行换液；
步骤C，RA神经元诱导，使用浓度为1-5×10-7M的RA进行诱导2-4d，每1-2d进行换液；
步骤D，EB贴壁培养，使用PLL包被培养板，将EB接种于包被的培养板上，加入适量的EB形成液，培养1-2d；
步骤E，后期神经元诱导，使用EB形成液和神经元培养液培养。
2.根据权利要求1所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
步骤A，通过差速贴壁法将MEF与ES进行分离，将胚胎干细胞接种于已用0.1%明胶包被过的细胞培养皿中，35℃-37℃培养30-45分钟，重复1-3次，进行ES和MEF分离。
3.根据权利要求2所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
步骤D，EB贴壁培养，使用PLL包被培养板，将EB接种于包被的培养板上，加入适量的EB形成液，培养温度37℃，5%CO2培养1-2d。
4.根据权利要求3所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
步骤A，通过差速贴壁法将MEF与ES进行分离，将胚胎干细胞接种于已用0.1%明胶包被过的细胞培养皿中，37℃培养40分钟，重复1-3次，进行ES和MEF分离。
5.根据权利要求4所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
步骤C，RA神经元诱导，使用浓度为5×10-7M的RA进行诱导2-4d，每1-2d进行换液。
6.根据权利要求5所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
步骤E，后期神经元诱导，使用EB形成液和神经元培养液培养，每天进行半数换液，一共6天。
7.根据权利要求1-6任一所述的体外诱导胚胎干细胞分化为神经元的方法，其特征在于，
所述EB形成液为EB形成培养基，
所述神经元培养液为神经元完全培养基，
所述RA为前期诱导液，由EB形成培养基含5×10-7M的维甲酸形成。
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