[发明专利]一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法

权利要求书

1.一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：在固定化反应器中加入聚苯胺单体和蒸馏水使得溶液浓度为0.01～0.2mol/L，用酸调节溶液pH为1.0～7.0；充分搅拌至溶液充分混合均匀后，在-10℃～45℃条件下恒温静置；再向固定化反应器中加入事先在-10℃～45℃条件下恒温的引发剂和助剂，引发剂与单体的摩尔浓度比为1∶0.3～1∶5，助剂和单体的摩尔浓度比为1∶1～1∶10，同时加入游离蛋白酶，单体质量与蛋白酶质量比为1∶0.01～1∶0.1；然后搅拌使整个体系混合均匀，放置于-10℃～45℃恒温条件下反应；反应结束后，分别用蒸馏水、无水乙醇过滤洗涤多次至滤液无色，然后将产物真空干燥或冷冻干燥，得到固定化酶。

2.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于所述的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、链霉菌蛋白酶、氨基肽酶、胶原酶。

3.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于所述的单体为苯胺及苯胺衍生物，即苯胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺、邻苯二胺、邻氯苯胺、间氯苯胺、邻甲氧基苯胺、邻巯基苯胺中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于调节单体溶液pH值的酸为无机酸，即盐酸、硫酸、硝酸、醋酸、磷酸中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于所述的引发剂为K₂Cr₂O₇、(NH₄)₂S₂O₈、Ce(SO₄)₂、FeCl₃、FeCl₄、AlCl₃、HAuCl₄、KIO₃、H₂O₂、MnO₂中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于所述的助剂为F127、丁基萘磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、二甲基二烯丙基氯化铵中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于真空干燥温度为10℃～45℃，真空度为0～-0.1MPa。

8.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于单体质量与蛋白酶在-10℃～45℃恒温条件下反应的时间为12～24h。

9.根据权利要求1所述的一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于将产物真空干燥或冷冻干燥8～24h，得到固定化酶。