[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的检测方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B₁的检测方法，其步骤包括：

（1）绘制标准曲线：将黄曲霉毒素B₁样品与有机溶剂共孵育，配置成不同浓度的黄曲霉毒素B₁标准品，在标准品中分别加入阻抗溶液；用多壁碳纳米管/离子液体/抗体修饰电极测得阻抗溶液中不同的黄曲霉毒素B1浓度的相应的阻抗值，再以阻抗差值为纵坐标，黄曲霉毒素B₁标准样浓度为横坐标，绘制标准曲线；

（2）将待测样品提纯后与有机溶剂共孵育，配成待测样品溶液，然后再加入阻抗溶液，用预处理过的多壁碳纳米管/离子液体/抗体修饰电极测得阻抗溶液的阻抗值，再根据步骤（1）中所得的标准曲线，计算待测样品中黄曲霉毒素B₁的浓度。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）和步骤（2）中的阻抗溶液为磷酸盐缓冲溶液，该溶液的pH值为6.8-8.0，浓度为0.5-1.5mmol/L；所述磷酸盐缓冲溶液中还含有浓度为0.5-1.5mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.05-0.15mol/L的KCl。

3.根据权利要求2所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中，将不同浓度的已知黄曲霉毒素B₁样品溶液分别与有机溶剂在35℃-40℃条件下共孵育20-30分钟，其中，黄曲霉毒素B1与有机溶剂的加入配比为：1-10ng：1mL。

4.根据权利要求2所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中，将提纯后的待测样品溶液与有机溶剂在35℃-40℃条件下共孵育20-30分钟，其中，待测样品与有机溶剂的加入配比为2-6μg：1mL。

5.根据权利要求1、3或4所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、三氯甲烷或丙酮。

6.根据权利要求2所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中，标准品与阻抗溶液的体积比为1:5-20；所述步骤（2）中，待测样品溶液与阻抗溶液的体积比为1:5-20。

7.根据权利要求2所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中，待测样品的提纯方法为，将待测样品用石油醚清洗，加入甲醇水溶液静置分层，取下层混合液加入硫酸钠溶液稀释，再加入三氯甲烷静置，将下层混合液脱水处理。

8.根据权利要求7所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述待测样品、甲醇、硫酸钠、三氯甲烷的加入配比为10g：40-45mL：1-2g：8-12mL。

9.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）和步骤（2）中的多壁碳纳米管/离子液体/抗体修饰电极的制备方法为，

（a）将长度为100-300nm的多壁碳纳米管和1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐混合，再加入黄曲霉毒素B₁单克隆抗体摇床反应，制得离子液体包裹的多壁碳纳米管混合液；

（b）将步骤（a）中制得的混合液滴加到经过预处理的玻碳电极表面，用磷酸盐缓冲溶液冲洗后备用。

10.根据权利要求9所述的黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于：所述步骤（a）中，多壁碳纳米管、1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐和黄曲霉毒素B₁单克隆抗体的加入配比为：1.2-2.4mg：1mL：0.6-1μg。