[发明专利]多肽Cbf-K16抗肿瘤药物的用途

说明书

技术领域：

本发明属于生物化学中的多肽药物技术领域，具体涉及一种多肽的用途，即多肽Cbf-K₁₆具有抗肿瘤作用的用途。 

背景技术：

抗菌肽是一种新型的抗微生物多肽，广泛存在于生物体内，通常带正电，富含疏水碱基，能形成两亲性结构，具有广谱性、高效性、稳定性等特点。研究证实抗菌肽不仅具有杀菌作用，还具有抑制或杀伤真菌、寄生虫、病毒以及肿瘤细胞等作用。 

Cathelicidin家族，是一类C端含有高度特异的成熟肽段而N端有一段Cathelin结构域的抗菌肽家族，主要发现于哺乳动物，已证实具有广谱抗菌活性。 

多肽Cathelicidin-BF是从金环蛇蛇毒中分离出来的活性多肽，是金环蛇基因编码的一种N端有α螺旋的直链多肽，含有三十个氨基酸残基，分子量3637.54Da，等电点为11.79。发明人前期研究中，针对多肽Cathelicidin-BF将其部分活性氨基酸位点进行突变，采用固相化学合成法获得对耐药性病原菌具有高抑制活性的抗菌多肽，简称多肽Cbf-K₁₆，其分子量3637.63Da，氨基酸序列如SEQ ID：NO.1所示，全序列为：赖氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-赖氨酸-亮氨酸-赖氨酸-赖氨酸-丝氨酸-缬氨酸-赖氨酸-赖氨酸-精氨酸-丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-赖氨酸-脯氨酸-精氨酸-缬氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-丝氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸。该技术记载于中国专利申请CN2012101719018中。 

发明内容

本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID：NO.1所示的多肽具有抗肿瘤的功效。药效学实验表明，多肽Cbf-K₁₆具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，可用来制备抗肿瘤药物。所述肿瘤优选肺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌或恶性黑色素瘤。 

下面是本发明的部分药效学实验及结果。 

一、多肽Cbf-K₁₆对不同肿瘤细胞的体外生长抑制作用 

胰酶消化对数生长期的人肺癌H460细胞、鼠肺癌Lewis细胞、人前列腺癌PC-3细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、鼠黑色素瘤B16F10细胞、鼠黑色素瘤B16细胞、人黑色素瘤A375 细胞、人肝癌HepG2细胞（人肺癌H460细胞、鼠肺癌Lewis细胞、鼠黑色素瘤B16细胞用含有10%FBS的RPMI-1640培养基，人乳腺癌MCF-7细胞用含有10%FBS的RPMI-1640培养基，人前列腺癌PC-3细胞用含10%FBS的F12培养基，鼠黑色素瘤B16F10细胞用含有10%NBS的RPMI-1640培养基，人肝癌HepG2细胞、人黑色素瘤A375细胞用含10%FBS的DMEM培养基），细胞用各自培养基调整细胞浓度为5×10⁴个/ml的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔加入细胞悬液100μl，每组设3复孔。置于37℃、5%CO₂细胞培养箱中继续培养，培养24h待细胞贴壁后，实验组加入用培养基稀释的不同浓度Cbf-K₁₆或多肽Cathelicidin-BF 20μl/孔（终浓度分别为5、10、20、40、80μM）。实验设置含RPMI-1640全培养基对照和未给予药物作用的空白对照。37℃、5%CO₂培养48h后，每孔加入5mg/ml的MTT 15μl，置于37℃、5%CO₂细胞培养箱中继续培养4h，离心，仔细吸去上清，每孔加入150μl DMSO，轻轻振荡使甲臜完全溶解，在490nm波长处用酶标仪测吸光值并计算。 

结果见附图1和2，图1和图2表明，在40μM浓度范围内多肽Cbf-K₁₆对肿瘤细胞：人肺癌H460细胞、鼠肺癌Lewis细胞、鼠黑色素瘤B16F10细胞、鼠黑色素瘤B16细胞、人前列腺癌PC-3细胞、人肝癌HepG2细胞有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，且量效关系明显。突变后多肽Cbf-K₁₆对肿瘤细胞的抑制作用较多肽Cathelicidin-BF均有所增强作用，特别是针对人肺癌H460细胞，人肝癌HepG2细胞，人乳腺癌MCF7细胞等细胞。多肽Cbf-K₁₆对各细胞株的IC50值如表1所示： 

表1 多肽Cbf-K₁₆对各细胞株的IC50值 

二、多肽Cbf-K₁₆对人肺癌H460细胞、鼠肺癌Lewis细胞体外形态学变化影响