[发明专利]用于生产D-对羟基苯甘氨酸的DNA分子、重组质粒以及重组菌

权利要求书

1.一种DNA分子，包括PL启动子、D-海因酶基因和N-氨甲酰水解酶基因，由所述PL启动子启动所述D-海因酶基因和所述N-氨甲酰水解酶基因的表达；

所述D-海因酶是如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有将DL-对羟基苯海因转化为N-氨甲酰对羟基苯甘氨酸的功能的由序列1衍生的蛋白质；

所述述N-氨甲酰水解酶是如下（c）或（d）：

（c）由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（d）将序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有将N-氨甲酰对羟基苯甘氨酸转化为D-对羟基苯甘氨酸的功能的由序列3衍生的蛋白质。

2.如权利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述PL启动子为如下1）或2）或3）的DNA分子：

1）序列表中序列5所示的DNA分子；

2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且具有启动子功能的DNA分子；

3）与1）限定的DNA序列具有90%以上同源性且具有启动子功能的DNA分子。

3.如权利要求1或2所述的DNA分子，其特征在于：

所述D-海因酶基因为如下4）或5）或6）的DNA分子：

4）编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

5）在严格条件下与4）限定的DNA序列杂交且编码所述D-海因酶的DNA分子；

6）与4）限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码所述D-海因酶的DNA分子；

所述N-氨甲酰水解酶基因为如下7）或8）或9）的DNA分子：

7）编码区如序列表中序列4所示的DNA分子；

8）在严格条件下与7）限定的DNA序列杂交且编码所述N-氨甲酰水解酶的DNA分子；

9）与7）限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码所述N-氨甲酰水解酶的DNA分子。

4.含有权利要求1至3中任一所述DNA分子的重组载体或重组菌。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体为在载体pUC18的多克隆位点插入所述DNA分子得到的重组质粒。

6.如权利要求4所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌是将权利要求5所述重组载体导入大肠杆菌得到的重组菌。

7.权利要求1至3中任一所述的DNA分子,或权利要求4所述的重组载体，或权利要求5所述的重组载体，或权利要求4所述的重组菌，或权利要求6所述的重组菌，在生产D-对羟基苯甘氨酸中的应用。

8.权利要求4或6所述重组菌的发酵物。

9.一种生产D-对羟基苯甘氨酸的方法，包括如下步骤：以DL-对羟基苯海因为底物，加入权利要求8所述发酵物，反应后得到D-对羟基苯甘氨酸。

10.一种生产D-对羟基苯甘氨酸的方法，包括如下步骤：以DL-对羟基苯海因为底物，加入权利要求4或6所述重组菌，反应后得到D-对羟基苯甘氨酸。