[发明专利]修饰的安卡拉痘苗病毒基因的基因组中保守基因之间的基因间位点

说明书

本申请是申请日为2007年8月24日，申请号为200780035385.3，发明名称为《修饰的安卡拉（MVA）痘苗病毒基因的基因组中保守基因之间的基因间位点》的中国专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求保护2006年8月25日提交的美国临时申请号60/840,093和2006年8月28日提交的美国临时申请号601840,755的权益，所述两份文献因而公开地在此处通过引用的方式完整并入。

技术领域

本发明涉及用于稳定整合外源DNA序列至MVA基因组内的插入位点。

相关技术的描述

痘病毒科的成员具有编码数百种蛋白质的庞大双链DNA基因组（《费氏病毒学，第五版》Moss,B.2007“痘病毒科：病毒及其复制”（Poxviridae:The Viruses and Their Replicationin Fields Virology,5th Ed）（D.M.Knipe,P.M.Howley,D.E.Griffin,R.A.1Lamb,M.A.Martin,B.Roizman和S.E.Straus,Eds）,LippincottWilliams&Wilkins,Philadelphia,PA）。已知高度减毒的痘苗病毒株-修饰的安卡拉痘苗病毒（MVA）的基因组序列（Sutter,G和Moss,B.1992美国科学院院报（Proc Natl Acad Sci USA）89:10847-10851；和Sutter,G.等1994疫苗（Vaccine）12:1032-1040），其中所述的修饰的安卡拉痘苗病毒不能生长在大多数哺乳动物细胞中并且是重组疫苗载体的良好候选物。修饰的安卡拉痘苗病毒已经在鸡胚成纤维细胞中传代超过570次，在此期间相对于宿主范围严格限制的亲代野生型Ankara株而言，6个重大缺失已经出现（Meyer，H.等1991普通病毒学杂志（J Gen Virol）72:1031-1038）。

发明简述

本发明涉及用于整合外源序列至痘苗病毒基因组的基因间区（IGR）内的新插入位点，其中所述的IGR位于该痘苗病毒基因组的两个相邻开放阅读框（ORF）之间或所述的IGR位于该痘苗病毒基因组的两个相邻开放阅读框的侧面，并且其中所述ORF对应于保守基因，并涉及用来插入外源DNA至痘苗病基因组内的相关质粒载体，并且还涉及作为药物或疫苗的含有插入所述新插入位点内的外源序列的重组痘苗病毒。

附图说明

图1．基于pol基因序列同一性的HIV-1和HIV-2的系统发生学关系。SIV_cpz和SIV_smm是分别从黑猩猩（chimpanzee）和白眉猴（sooty mangabey monkey）中回收的类人灵长类慢病毒。

图2．基于全长pol基因序列的具有四种不同SIV_cpz分离株的HIV-1M组、N组和O组（group）的系统发生学关系。短棒表示遗传距离0.1（10%核苷酸趋异性）并且星号指出基于env序列的N组HIV-1分离株的位置。

图3．HIV-1分离株的嗜性及生物学特征。

图4．HIV-编码的蛋白质。显示HIV基因的位置、初级翻译产物（在一些情况下是多聚蛋白）的尺寸和加工的成熟病毒蛋白。

图5．成熟HIV-1病毒粒子的示意图。

图6．HIV-1Env糖蛋白的线性示意图。箭头1表示gp160切割成gp120和gp41的位点。在gp120中，交叉线区域代表可变结构域（V₁-V₅）并且空心框描述保守序列（C₁-C₅）。在gp41胞外结构域中，显示几个结构域：氨基端融合肽和两个胞外结构域螺旋（氨基端螺旋与羧基端螺旋）。跨膜结构域由黑色框代表。在gp41胞浆结构域中，显示Tyr-X-X-Leu（YXXL）内吞基序（SEQ ID NO:1）和两个预测性螺旋结构域（螺旋-l和螺旋-2）。氨基酸编号被标出。

图7．pLW-73转移载体。

图8．pLW-73转移载体的核苷酸序列（上部链，SEQ IDNO:2；底部链，SEQ ID NO:3）。

图9．编码乌干达进化枝D Env蛋白（分离株A07412）的核苷酸序列（SEQ ID NO:4）。