[发明专利]总PSA和游离PSA二合一化学发光免疫诊断试剂盒的制备方法

权利要求书

1.一种总PSA和游离PSA二合一化学发光免疫诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

步骤1：取0.5～1.5mg抗PSA包被抗体用0.05M、pH9.6的碳酸缓冲液稀释成4～6μg/ml，在96孔化学发光板上每孔加100～120μl；4℃静置过夜，次日将板子拍杆，加入含有1％牛血清白蛋白的溶液150～250μl，37℃封闭反应0.5～1.5小时；将板子再次拍干，置于烘干间抽湿烘干后真空包装；

步骤2：取0.5～1.5mg抗PSA单抗和0.5～1.5mg辣根过氧化物酶溶解于0.5～1.5ml、0.1M、pH8.0的磷酸缓冲液中，加入水溶性碳二亚胺0.05～0.15mg；室温搅拌0.5～1.5小时；取出反应液对0.02M、pH7.4的磷酸缓冲液透析过夜，中间换液2～4次；

步骤3：取0.5～1.5mg抗PSA单抗和0.5～1.5mg碱性磷酸酶溶解于0.5～1.5ml、0.1M、pH6.0的柠檬酸缓冲液中，加入4％戊二醛0.05～0.15ml，室温搅拌0.5～1.5小时，加入0.05～0.15mg赖氨酸终止反应，室温继续搅拌10～20分钟，取出反应液对0.02M、pH7.4的磷酸缓冲液透析过夜，中间换液2～4次；用含有0.2％牛血清白蛋白的0.1M、pH7.4的Tris-HCl缓冲液将步骤2和步骤3反应液混合稀释900～1100倍，10毫升分装备用；

步骤4：分别量取90～110ml已灭活过的新生牛血清4～6份，分别往每份血清中添加总PSA标准品原料和游离PSA标准品原料，混合均匀后将配制的血清样品用罗氏电化学发光系统分别标定总PSA浓度值和游离PSA浓度值，分装后作为试剂盒的系列校准品；

步骤5：分别采用市售的金刚烷化学发光底物系统和鲁米诺化学发光底物系统作为发光底物；金刚烷系统化学发光底物每个试剂盒6毫升，鲁米诺化学发光底物系统又分为A液、B液两个组分，其中A液为鲁米诺溶液，6毫升；B液为氧化剂溶液，6毫升；

步骤6：配制含有0.05％TWEEN20的0.01M pH7.4的Tris-HCl缓冲液为洗涤液。

2.如权利要求1中所述的制备方法，其特征在于，在步骤1中，取1mg抗PSA包被抗体用0.05M、pH9.6的碳酸缓冲液稀释成5μg/ml，在96孔化学发光板上每孔加110μl；4℃静置过夜，次日将板子拍杆，加入含有1％牛血清白蛋白的溶液200μl，37℃封闭反应1小时；将板子再次拍干，置于烘干间抽湿烘干后真空包装。

3.如权利要求1中所述的制备方法，其特征在于，在步骤2中，取1mg抗PSA单抗和1mg辣根过氧化物酶溶解于1ml、0.1M pH8.0的磷酸缓冲液中，加入水溶性碳二亚胺0.1mg。室温搅拌1小时；取出反应液对0.02M pH7.4的磷酸缓冲液透析过夜，中间换液3次。

4.如权利要求1中所述的制备方法，其特征在于，在步骤3中，取1mg抗PSA单抗和1mg碱性磷酸酶溶解于1ml、0.1M pH6.0的柠檬酸缓冲液中，加入4％戊二醛0.1ml，室温搅拌1小时，加入0.1mg赖氨酸终止反应，室温继续搅拌15分钟，取出反应液对0.02M pH7.4的磷酸缓冲液透析过夜，中间换液3次；用含有0.2％牛血清白蛋白的0.1M pH7.4的Tris-HCl缓冲液将步骤2和步骤3反应液混合稀释1000倍，10毫升分装备用。

5.如权利要求1中所述的制备方法，其特征在于，在步骤4中，分别量取100ml已灭活过的新生牛血清5份。

6.如权利要求1中所述的制备方法，其特征在于，金刚烷系统化学发光底物每个试剂盒6毫升，鲁米诺化学发光底物系统又分为A液、B液两个组分，其中A液为鲁米诺溶液，6毫升；B液为氧化剂溶液，6毫升。