[发明专利]鉴定大豆Lox3特异性引物及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及鉴定大豆Lox3缺失体的特异性引物及其方法，主要应用于分子标记的技术领域。

背景技术

大豆脂肪氧化酶（Lox）是一种含非血红素铁、水溶性球蛋白质。Lox通过催化不饱和脂肪酸中顺，顺1,4-戊二烯结构，形成过氧化氢衍生物，再继续转化成低级的醛和酮等有害物质，从而产生豆腥味和其他挥发性物质，阻碍了大豆在食品中的广泛应用。Lox催化产生的过氧化氢物，能直接与食品中的营养成分结合，降低食品的食用品质和营养价值。高温处理可减轻大豆豆醒味, 但会导致蛋白质变性, 使蛋白质加工性能和利用率降低。此外，通过微波照射、改变介质pH、有机溶剂萃取和醛水解酶水解等方法，也可以降低或消除大豆豆腥味。上述方法都会不同程度增加大豆产品成本，且常常会导致大豆蛋白质溶解度下降，降低食品营养价值。因此，通过遗传育种手段选育大豆Lox缺失体材料，以降低或消除Lox活性的影响具有重要意义。王若兰等（2008）研究认为，大豆Lox缺失体样品在储藏期间的品质变化比正常品种缓慢，Lox缺失可在一定程度上提高大豆储藏品质的稳定性。王金龙等（2000）研究认为，大豆Lox缺失对蛋白质、脂肪及脂肪酸含量没有影响，但可能引起种子中脯氨酸含量降低, 而对其它氨基酸无影响。脯氨酸不属于人体必需氨基酸，故Lox缺失不会引起大豆营养品质降低。Julian等（2010）采用探针技术分别鉴定Lox2和Lox3，但该技术存在技术复杂、费用较高等问题。通过分子标记技术筛选大豆Lox缺失体，可以加快无腥大豆品种选育进程，进而从根本上改善大豆产品豆腥味，提高大豆的储藏品质。对目前已有的LOX缺失体中LOX基因进行测序分析，表明Lox1缺失体在其编码基因的第8个外显子内缺失1个74bp的片段，导致Lox1蛋白翻译过早终止；Lox3缺失体在其编码基因的第1个外显子内缺失1个单核苷酸“G”，从而导致移码突变。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供鉴定大豆Lox3缺失体的特异性引物及其方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种鉴定大豆Lox3缺失体的特异性引物，包括以下两组引物对：

Lox3F：TAACCAGCGTTGGGGGAA ；

Lox3R：CATTTATAGACGTGCGTGCA。

一种上述的特异性引物鉴定大豆Lox3缺失体的方法，包括以下步骤：

（1）以待测缺失体的大豆基因为DNA模板，将上述两组引物对上述DNA模板进行PCR扩增；

（2）若述PCR扩增产物中有474bp条带，则上述待测大豆基因含有Lox3，若无474bp条带，则上述待测大豆基因缺失Lox3。

进一步地，上述Lox3缺失体的大豆为五星1号、五星4号、鉴31中的任意一种。

本发明的有益效果：

本发明提供的特异性引物及其鉴定技术，不但节约时间和费用，而且鉴定结果准确可靠，可显著提高对Lox3缺失体材料的筛选效率。

附图说明

图1为实施案例1琼脂糖凝胶电泳的示意图。

具体实施方式

下面根据附图和实施例对本发明作进一步详细说明。

在下述的实施案例1中，一共选取七种大豆品种进行鉴定，这七种大豆品种均由河北省农林科学院提供的常用品种。

1、五星1号

审定编号: 冀审豆2001002号 

品种来源: 河北省农林科学院粮油作物研究所1997年育成，亲本组合为冀豆9/Century。 

2、五星2号

审定编号：国审豆2004005

选育单位：河北省农林科学院粮油作物研究所

品种来源：冀豆9号×Century

3、五星3号

选育单位：河北省农林科学院粮油作物研究所

品种来源：冀豆9号×Century

4、五星4号

审定(登记)编号： 冀审豆2009005号 

选育单位： 河北省农林科学院粮油作物研究所 

品种来源： 冀豆12×Suzuyutaka 

5、鉴31

由河北省农林科学院提供，为推广品种

6、中黄13

品种审定编号：国审豆2001008

品种来源：豫豆8号/中90052－76，为推广品种

选育单位：中国农业科学院作物育种栽培研究所