[发明专利]抑癌基因FBXW7在制备预防或治疗乳腺肿瘤药物中的应用、表达载体和诊断药物

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，具体是抑癌基因FBXW7在乳腺癌制备预防、诊断及治疗乳腺肿瘤药物中的应用及其表达载体。

背景技术

肿瘤细胞基本特征是细胞生长失控和分化受阻。这种细胞生长失控和分化受阻是由于多种基因缺陷积累的结果，主要表现在两个方面：一是癌基因的激活或过度表达，另一方面是肿瘤抑制基因的失活。正常情况下，肿瘤抑制基因能够抑制细胞的恶性转化，对正常细胞的增殖其负调节作用，当肿瘤抑制基因失活后，正常细胞增殖失控，转化成肿瘤细胞。对癌基因和抑癌基因的研究对最终揭示细胞癌变的机制、实现肿瘤的预防和有效的基因治疗具有重大的理论和现实意义。

肿瘤抑制基因(tumor supperssor genes)，是指一类可抑制细胞生长、增殖，诱导细胞凋亡，并有抑制癌变潜能的基因。当它失活时，协同癌基因导致细胞恶性转化。目前已分离的肿瘤抑制基因包括有，与DNA结合直接作用起到基因转录调节作用的，如p53、WT1；间接调节基因转录的，如Rb、APC；在细胞周期中发挥调节作用的，如NF1、TGFβ；以及调节DNA修复和基因组稳定性的，如MSH、MLH等。

FBXW7(F-box and WD repeat domain-containing protein7，也称为hCDC4，FBW7)是F-box蛋白家族成员，为SCF(Skp-cullin-F-box)泛素连接酶的靶蛋白识别组分。近期研究表明，FBXW7是P53依赖的抑癌基因，在多数人类恶性肿瘤中包括乳腺癌、直肠癌、胃癌、卵巢癌和白血病中存在突变或缺失。FBXW7通过泛素化调控多种癌蛋白如周期蛋白E、c-Myc、c-Jun、Notch和mTOR等的含量是其发挥肿瘤抑制作用最常见的机制。我们研究表明FBXW7是一重要抑癌基因网络（p53-FBXW7-HIPK2-PTEN）的中心节点。FBXW7的突变或缺失会导致染色体不稳定性增加以及细胞生长失控。

但是目前，FBXW7在乳腺癌中的作用机制尚不完全清楚，其功能和表达变化的临床意义尚未有报道。因此，分析FBXW7与乳腺癌发生发展的关系，探索针对FBXW7途径的肿瘤治疗和预警策略至关重要。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种新的抑癌基因在乳腺癌预后预测诊断及制备预防、治疗乳腺肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

发明人研究发现，FBXW7（如SEQ ID NO.1所示）基因在乳腺癌肿瘤组织中的特异性低表达与乳腺癌的分子类型相关，并且在特定分子类型的乳腺癌中具有延长患者生存时间的作用，因此，在筛选FBXW7基因低表达的肿瘤标本的基础上，特异性恢复该抑癌基因在肿瘤组织细胞中的表达，有望成为乳腺癌靶向治疗的一种新方法和手段。

FBXW7表达作为乳腺癌预后预测和预警诊断的生物靶标。

抑癌基因FBXW7在制备预防或治疗乳腺肿瘤药物中的应用。

所述乳腺肿瘤预防或治疗药物以FBXW7基因为靶点。

所述药物为药剂学上可接受的任何一种剂型，包括粉剂、注射剂、胶囊、片剂或口服液。

所述乳腺肿瘤为导管型、基底型、腔上皮型乳腺癌A型或B型、ERBB2型、ER阳性和阴性。所述乳腺癌肿瘤包括但不限于乳腺癌。

一种预防或治疗乳腺肿瘤的表达载体，它是由FBXW7基因和pcDNA3.1载体构建而成。

上述预防或治疗乳腺肿瘤药物的表达载体的制备方法，步骤过下：

（1）获得cDNA：全长FBXW7基因的开放阅读框采用RT-PCR法从正常乳腺组织的总RNA中获得，然后进行扩增，扩增所用引物为

FBXW7-cF：（SEQ ID NO.2）ttcaccatgaatcaggaactgctc

FBXW7-cR：（SEQ ID NO.3）acacctgtacttcacttgatga

（2）将上述cDNA连接到TOPO PCR Blunt载体，转化感受态细菌，在含青霉素培养LB板中培养，挑取阳性克隆培养，经测序选择正确克隆；

（3）FBXW7表达载体的构建

抽提正确克隆的质粒，用EcoRⅠ酶切后，经1%琼脂糖凝胶电泳分离后回收目的片段，连入线性化的pcDNA3.1载体，转化感受态细菌，在含青霉素培养LB板中培养，挑取阳性克隆培养，经酶切和测序双鉴定后，保存正确克隆，抽提质粒，即得。