[发明专利]一种盐酸小檗碱片进行HPLC检测的前处理方法

说明书

技术领域

 本发明一种盐酸小檗碱片进行HPLC检测的前处理方法属于盐酸小檗碱检测技术领域。

背景技术

 盐酸小檗碱片为抗菌药，对痢疾杆菌、大肠杆菌引起的肠道感染有效，用于治疗肠道感染、腹泻。盐酸小檗碱片收载于中国药典2010年版二部，含量测定采用高效液相色谱法。在实际检验工作中时有含量测定结果偏低、重复性差的现象发生。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种样品损失少，检测时重复性好的盐酸小檗碱片进行HPLC检测的前处理方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：将待检测的盐酸小檗碱片进行研磨至粒度均匀的细粉，称取样品，放入容量瓶中，用流动相作为溶剂对所述样品溶解定容，得到一次定容溶液；

然后将所述一次定容溶液采用离心分离，取上清液放入另一容量瓶中进行二次定容，即得到用于进样的前处理液。

所述细粉的粒度为150-200目。

所述流动相为磷酸盐溶液与乙腈按照体积比60:40配制而成，所述磷酸盐溶液为0.05mol/L的磷酸二氢钾和0.05mol/L的庚烷磺酸钠以体积比1:1混合，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0。

所述一次定容溶液的浓度为3mg/L-5mg/L。

所述离心分离的条件为1500-4000r/min，离心6-15min。

所述前处理液的浓度为0.3mg/L-0.5mg/L。

本发明与现有技术相比具有较好的效果为：本发明所采用的前处理方法使得盐酸小檗碱的样品损失少，HPLC检测结果重复性好。体现在前处理过程中不去包衣采用充分研磨的方法，降低了如果去具体包衣不当样品损失的问题；在溶解样品是采用流动相作为溶剂，减少了淀粉等辅料在沸水中产生糊化现象对盐酸小檗碱的吸附作用，保证了回收率；用离心分离的方法代替滤膜过滤，减少了膜过滤对重复性的影响，提高了测量的稳定性。

影响因素的讨论：

一、包衣的影响

中国药典 2010年版二部未标明需去除包衣。经试验去糖衣前后的含量并无明显差异。分析原因应该为研磨、称量、溶解过程和过滤等综合因素影响。

二、研磨程度的影响

由于各生产厂家所用辅料和制剂工艺不同，在研磨时发现研磨难易程度不尽相同。如果不能研磨成极细的粉末，细粉和颗粒中盐酸小檗碱的含量是不均匀的，尤其是包衣部分以颗粒形式存在影响更为突出。

三、溶剂的影响

中国药典2010年版二部试验方法是：以沸水为溶剂溶解样品和对照品。由于盐酸小檗碱在水中微溶，在热水中溶解。但以沸水溶解时盐酸小檗碱片中的淀粉等辅料会产生糊化现象，影响滤过，以及对盐酸小檗碱可能存在吸附作用。分别以沸水、40%乙腈和流动相为溶剂，以滤膜(0.45um)滤过，弃去初滤液约10mL后进行下一步稀释。结果表明，以流动相为溶剂含量最高。

四、滤过方式的影响

中国药典2010年版二部试验方法是：样品溶液以滤膜(0.45um)滤过，弃去初滤液约8mL后进行下一步稀释。按中国药典2010年版二部试验方法以水为溶剂配制样品溶液和对照品溶液。样品溶液采用滤膜(0.45um)、滤纸、垂熔漏斗滤过和2000r/min离心10 min处理后倾取上清液， 其中前三种方法分别弃去10mL初滤液；对照品溶液采用滤膜(0.45um)、滤纸和垂熔漏斗滤过，并弃去10mL 初滤液。结果表明，溶液采用不同处理方式，结果偏差较大。其中离心的效果是最佳的；滤纸和垂熔漏斗吸附较强；同时对照品的处理结果表明，滤膜(0.45um)滤过也有31.5%的吸附。因此不建议采用滤膜、滤纸和垂熔漏斗滤过。

五、回收率试验 

取经105℃干燥4h后的盐酸小檗碱对照品，加入处方量的辅料，分别用沸水和流动相溶解，以2000 r/min离心10min，倾取上清液，按含量测定的方法测定回收率。

结果表明，以沸水溶解样品回收率偏低，偏差亦较大，制剂辅料有吸附；以流动相溶解样品回收率良好，制剂辅料无干扰。

综上影响因素和试验结果，盐酸小檗碱片含量测定的改进方法为：不去包衣，充分研磨至细粉状，粒度均匀，尤其是包衣部分不能有明显颗粒感；选择流动相作为溶剂溶解对照品和样品；样品溶液采用离心后，取上清液备用。

糖衣片和薄膜衣片若去包衣不当，测定结果反倒会偏低，所以只要研磨足够细，混合均匀，糖衣片和薄膜衣片是不必去包衣的。