[发明专利]高纯度溶血磷脂酰胆碱的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯度溶血磷脂酰胆碱的制备方法及其应用。

技术背景

溶血磷脂酰胆碱由磷脂酰胆碱去掉一个脂肪酰基而得到的产物。磷脂酰胆碱(亦称卵磷脂)，广泛存在于动植物体内，在动物的脑，肾上腺及细胞中含量较多。相比于磷脂酰胆碱，溶血磷脂酰胆碱的HLB值大，不仅保留了亲油性，也因非极性基团的减少而使其亲水性能增加，其润湿能力、乳化性、乳化能力均优于磷脂酰胆碱。溶血磷脂酰胆碱在改善焙烤产品的组织结构上有着重要的作用。溶血磷脂酰胆碱亦有生物活性，对动脉粥样硬化的预防、诊断和治疗有着很重要的作用。目前，溶血磷脂酰胆碱在食品、化妆品、医药等方面有着越来越广泛的应用，所以有效地制备高纯度的溶血磷脂酰胆碱就显得至关重要。

早在二十世纪初人们就已经知道磷脂酰胆碱可以借助酶催水解转化成溶血磷脂酰胆碱。借助蛇毒提取物使磷脂酰胆碱降解的早期研究结果已经证明蛇毒的溶血作用发生在细胞膜的卵磷脂部分。1935年，Hughes用实验证明卵磷脂转化成溶血卵磷脂(溶血磷脂酰胆碱)的单分子膜水解与诸如pH值、温度和卵磷脂分子的表面浓度等因素有关。在单分子层中卵磷脂分子填充物大大降低了水解速度。Hanahan证明在鸡蛋卵磷脂与磷脂酶A2之间的醚溶性络合物导致释放不饱和脂肪酸和溶血磷脂酰胆碱。采用95％的乙醇、氯仿或石油醚作溶剂时，不能察觉磷脂酶A2对磷脂酰胆碱的水解作用。在1963年的报告中，Dawson完成的实验也发现了磷脂酶A2将磷脂酰胆碱水解成溶血磷脂酰胆碱和脂肪酸分子。Dawson曾确定酶的活性与钙离子存在与否有关，并且添加醚或丁醇将激发磷脂酶的活性。授权给Unilever Ltd.的英国专利第1,215,868号介绍了进一步方案改进，即在有脂肪存在的条件下进行有磷脂酶A2参与的磷脂的水解反应。

现有技术中常见的制备溶血磷脂酰胆碱的方法有多种，常用的方法都是将磷脂酰胆碱作为反应底物，加入合适的酶在一定条件下反应获得溶血磷脂酰胆碱。例如CN1197115A中让由磷脂酶A1或A2组成的水解酶作用于水合卵磷脂生产溶血卵磷脂，然后将丙酮搅拌加入所得溶血卵磷脂溶液，丙酮的比例为所述溶血卵磷脂溶液水量体积的1至4或5或更多倍，使该溶血卵磷脂相漂浮或沉淀，分离所述溶血卵磷脂相，接着重复进行丙酮提取过程，生产除掉了所述溶血卵磷脂生产中的游离脂肪酸副产品和来源于原料的油溶性杂质的高纯度植物溶血卵磷脂；再例如CN102277393A中将磷脂酰胆碱加入低碳醇溶液中，在一定温度下搅拌混合均匀后，加入脂肪酶，在恒温下搅拌将脂肪酶催化磷脂酰胆碱醇解生成溶血磷脂酰胆碱。在上述这些制备方法中，尚存在一些不足，例如磷脂酶A2的价格较贵，因此成本较高；磷脂酰胆碱的转化率不高，因此反应的终产物中存在未反应的原始物质和副产品的比例较高；或使用了脂肪酶，虽然降低了成本，但是所带来的副产品增多，对提纯工艺有了更高的要求。

代谢性骨病是一种在生物体内破骨细胞和成骨细胞的平衡被破坏而发生的疾病。最有代表性的骨疾病是骨质疏松症。骨质疏松症是因为破骨细胞的活性比成骨细胞的活性增加而引起骨量减少所致的症状。一旦发生骨质疏松症，皮质骨变薄、髓腔增大、骨小梁变细、骨逐渐变成多孔质结构。随着骨质疏松症的进展，骨强度下降，诱发腰痛和关节痛，对轻微的冲击也易发生骨折。代谢性骨病此外还有乳腺癌或前列腺癌的癌骨转移、原发性骨癌(比如多发性骨髓瘤)、风湿性或者退行性关节炎、被引起牙周疾病的细菌感染后牙槽骨被破坏的牙周疾病、移植牙科用移植物后发生的炎症性牙槽骨吸收疾病、在整形外科领域，为了固定骨而移植移植物后引起的炎症性骨吸收疾病、由多种遗传因素而发生的Paget`s disease等。

近几年，对治疗骨质疏松症等代谢性骨病的分子生物学研究很活跃，开发了骨形成促进因子和破骨细胞抑制因子。骨形成促进因子有氟化物、甲状旁腺素、转化生长因子(TGF-β)、骨形成蛋白、雌激素、降血钙素、维生素D和其衍生物、双磷酸盐(bisphosphonate)(Jardine et al.，Annual Reports in Medicinal Chemistry，31，211(1996))等。

现已有很多物质被开发为骨质疏松症的治疗药物，其中最常用的药物是雌激素，但还没有完全鉴定其实际效能，有一生都要服用的缺点，而且长期服用时可增加乳腺癌和子宫癌的发病率。阿仑瞵酸钠(alrendronate)也具有其效能不明确，在消化道内的吸收缓慢，引起胃和食道粘膜炎症等问题。钙制剂虽然被认为副作用少而且效果优秀，但与其说是治疗药物倒不如说是预防制剂。此外还有降血钙素等维生素D制剂，但对其效能和副作用方面还缺乏充分的研究。

发明内容