[发明专利]一种检测与女性抑郁症相关的SNP的PCR试剂盒

权利要求书

1.SEQ ID NO：1所示的部分甘丙肽基因的核苷酸序列中第91位核苷酸的A/G多态性序列在制备用于诊断女性抑郁症的试剂盒中的引物和/或探针的应用。

2.一种针对女性抑郁症易感人群进行遗传筛查PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：分离包装的引物、无MgCl₂的缓冲液、高保真DNA聚合酶、MgCl₂、dNTP料和水组成；其中分离包装的引物及其核苷酸序列如下：

上游引物：5′-TCATGTCAAATATAGCCGACTT-3′(SEQIDNO：2)；

下游引物：5′-AGAACCGTACACAGATCAAG-3′(SEQID NO：3)；

rs694066_AF：5′-GTTCTAAGTCCTCTGCCATGCCA-3′(SEQ ID NO：4)；

rs694066_AR：5′-GGTCCAGCCTCGTTTTTCCT-3′(SEQ ID NO：5)；

rs694066_GF：5′-GTTCTAAGTCCTCTGCCATGCCG-3′(SEQ ID NO：6)；

rs694066_GR：5′-ACGGGCAATGAGGTCAAGAG-3′(SEQ ID NO：7)。

3.权利要求2所述试剂盒在检测rs694066位点多态性的使用方法，包括以下步骤：

1)样品基因组DNA的提取：按照常规的DNA提取方法进行DNA提取；

2)目的基因片段的PCR扩增：以第1)步基因组DNA为模板，用上、下游引物扩增目的基因片段，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ IDNO：2，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ IDNO：3；PCR扩增中各组分的用量为：浓度为50μmol上游引物和浓度为50μmol的下游引物各0.5μmol；无的缓冲液2.5μL；5U/μL的DNA聚合酶0.25μL；浓度为2.5mmol的dNTP2μL；100mmol/L MgCl₂ 1μL；去离子水17.75μL；基因组DNA样本1.5μL。目的基因PCR扩增条件：94℃预变性15min，94℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸1min，扩增35个循环，72℃延伸10min。

3)rs694066位点多态性检测：以第2)步所得的基因片段为模板，分别以rs694066_A+rs694066_AR和rs694066_G+rs694066_GR引物对扩增多态性位点基因片段；PCR扩增中各组分的用量为：浓度为50μmol上游引物和浓度为50μmol的下游引物各0.5μL；无Mg²⁺的缓冲液2.5μL；尝试为5U/μL的DNA聚合酶0.25μL；浓度为2.5mmol的dNTP2μL；100mmol/L MgCl₂ 1μL去离子水17.75μL；模板DNA2μL。PCR扩增条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，62℃退火1min，72℃延伸1min，扩增35个循环，72℃延伸10min。

4)结果判定：1.5％琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，当扩增片段长度为125bp时rs694066位点的基因型为A，在其互补链上等位位点为T；当扩增片段长度为283bp时rs694066位点的基因型为G，在其互补链上等位位点为C。