[发明专利]乳酸菌固态混菌发酵方法、所得菌剂及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳酸菌发酵方法，尤其涉及一种乳酸菌固态混菌发酵方法，本发明还涉及用该方法制得的乳酸菌固态混菌发酵菌剂，本发明还进一步涉及了乳酸菌固态混菌发酵菌剂在养殖水体水质改良中的用途。

背景技术

近20年来,水产养殖业在我国得到了迅猛的发展，随着集约化程度的提高，养殖密度的增大，代谢产物也大幅增加，养殖水体污染日益严重；同时工业废水、生活污水的排放也使养殖水域环境质量日益下降。这不仅直接危害养殖对象，而且也是疾病频繁发生的主要诱因。因而，如何改善养殖水质成为水产养殖成败的关键问题之一。无度地使用各种药物和无度、无序、无处理地换水、排污成了养殖者的常用手段和措施。最终，前者破坏了养殖动物、微生物和环境所构成的动态平衡，导致疾病的爆发，并且危及养殖产品的食用安全，后者既加大了外来风险又增加了水源的污染，增加病害交叉感染和流行的机率。近年来，微生物制剂在水产养殖中作为饲料添加剂、池塘水质净化剂得到了广泛的应用，应用结果表明，微生态制剂不仅可以改善养殖水域环境，还可以提高养殖对象的机体免疫力，减少病害的发生，使养殖活动向着良性循环方向发展。

大量的研究表明，乳酸菌可促进养殖水体饵料生物大量繁殖、生长，并且可分解残饵、粪便及水中有机质，改良水质，抑制水体中有害菌的繁殖生长，调节菌藻平衡。乳酸菌固态产品保质期长短及保质期内乳酸菌活菌数与产品质量息息相关。乳酸菌活菌数低，则不易在水环境中成为优势菌群，无法发挥其功效。

现有乳酸菌固态发酵多为熟料发酵，能耗大，生产成本高，且多采用单菌种发酵，菌种单一，代谢产物种类及数量均有限，所得到的发酵产品的活菌数量低，保质期短，储存过程中活性不断降低，产品质量难以保障。

酵母多糖是一种绿色饲料添加剂，具有提高水产动物免疫功能，调节动物肠道微生态平衡(促进有益菌增殖、控制致病菌生长)，从而维持动物的生长和健康。因此，酵母多糖与益生菌的联用，在水产养殖中的应用具有很好的前景。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种生产成本较低、产品活菌数高的乳酸菌固态混菌发酵方法。本发明的另一个目的是公开了使用本发明的乳酸菌固态混菌发酵方法所得菌剂和所述菌剂在养殖水体水质改良中的用途。

为达到所述目的，本发明的技术方案如下：

一种乳酸菌固态混菌发酵方法，包括如下步骤：

(a)将屎肠球菌（Enterococcus Faecium）、乳酸杆菌（Lacticacid bacteria）、及粪肠球菌（Enterococcus faecalis）分别接种至液态发酵培养基进行培养，得到三个菌种的种子液。

(b)将上述三个菌种的种子液接入固态发酵培养基进行发酵培养。

(c)将步骤(b)所得的发酵物料烘干。

(d)向烘干后的发酵物料中添加酵母多糖，混合均匀后即得到乳酸菌固态混菌发酵菌剂。

其中，上述步骤(a)中屎肠球菌（Enterococcus Faecium）、乳酸杆菌（Lacticacid bacteria）、及粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的接种量为1.8～2.2‰，接种至液态发酵培养基后在36～38℃恒温发酵24～30h；所述液态发酵培养基由以下组分组成：按重量百分比记，蔗糖4～6‰，柠檬酸三铵1.5～2.5‰，酵母膏4～6‰，乙酸钠1.5～2.5‰，磷酸氢二钾1.5～2.5‰，硫酸镁0.16～0.24‰，硫酸锰0.03～0.07‰，生石灰0.8～1.2‰，余量为水；按上述配方配制好液态发酵培养基后，调节其pH值至7.5～8.0；所述液态发酵培养基可无需灭菌处理，直接使用。

其中，上述步骤(a)中屎肠球菌（Enterococcus Faecium）、乳酸杆菌（Lacticacid bacteria）、及粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的接种量优选为2‰，接种至液态发酵培养基后在37℃恒温发酵24h；所述液态发酵培养基各组分含量优选为：按重量百分比记，蔗糖5‰，柠檬酸三铵2‰，酵母膏5‰，乙酸钠2‰，磷酸氢二钾2‰，硫酸镁0.2‰，硫酸锰0.05‰，生石灰1‰，余量为水；按上述配方配制好液态发酵培养基后，调节其pH值至8.0；所述液态发酵培养基可无需灭菌处理，直接接种发酵。