[发明专利]儿茶素应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及儿茶素应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的新用途。

背景技术

儿茶素及其氧化产物都是碳氢氧三元化合物，是由糖类经一系列酶的作用，通过莽草酸途径，形成苯环化合物，最后合成为儿茶素。儿茶素是茶叶的重要成分，约占茶多酚含量的75％到80％，也是茶的苦涩味的来源之一。儿茶素具有明显的酚的特性，能使重金属和蛋白质沉淀，在水溶液中易被空气氧化，常用作抗氧化剂。已报道儿茶素在防治心血管疾病、预防癌症等具有多种功能，但在解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的功效方面未见报道。

发明内容

本发明提供一种利用儿茶素制成的口服液，应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的新用途。具体包括以下步骤：

1)儿茶素按一定浓度配制成溶液；

1)建立小鼠PAEs类环境内分泌干扰物染毒模型及儿茶素干预分组实验；

2)干预效果生物学指标检测。

本发明目的是利用儿茶素解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物。

附图说明

图1为肝脏组织HE染色

图2为睾丸组织HE染色

图3为睾丸组织间质细胞芳香化酶表达免疫荧光

具体实施方式

本发明涉及一种利用儿茶素解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物，通过以下实验例加以说明。

1材料和方法

1.1材料

1.1实验动物

雄性小鼠(ICR)购自杭州师范学院实验动物中心。

1.2试剂

苏木素、伊红购自珠海贝索生物技术有限公司；Giemsa染料购自上海生工生物工程有限公司；荧光染料Rh123、FITC标记山羊抗兔二抗、兔抗芳香化酶多抗购自Santa Cruz；包埋石蜡购自Leica；免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；环磷酰胺(CP)购自上海第二制药厂；邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)、邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP)购自上海百灵威科技有限公司。按等质量混合6种PAEs类化合物(DMP、DEP、DBP、BBP、DEHP、DPP)溶于植物油配制成浓度低、中、高(40mg/kg、400mg/kg、4000mg/kg)三种不同剂量的染毒试剂，4℃保存备用。儿茶素按10mg/kg～50mg/kg浓度配制水溶液。

1.3仪器

荧光显微镜购自Nicon；切片机购自Leica；荧光分光光度计购自Thermo。

1.2雄性小鼠骨髓微核率测定

雄性小鼠54只，体重约20g，随机分成9组，每组6只。包括：混合染毒低、中、高剂量组(40，400，4000mg/kg)，单一剂量组(DBP，4000mg/kg)，干预复合高剂量组，干预对照组(儿茶素，25mg/kg)，阳性对照组(CP)，空白组(植物油)，正常组。染毒组连续染毒4天，阳性对照组于处死前两天给予腹腔注射CP40mg/kg，每天一次。各组于末次用药后次日脱颈椎致死，每只小鼠取其两侧股骨骨髓，制片。细胞涂片置显微镜油镜下观察，每只小鼠骨髓涂片计数1000个骨髓嗜多染红细胞，若一个嗜多染红细胞中出现两个或两个以上微核，仍按一个有微核细胞计数。并计数200个细胞中多染红细胞(PCE)与正染红细胞(NCE)的比值。应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，平均值以标准差反映离散水平，两组之间差异显著性进行t检验分析。

1.3雄性小鼠精子畸形率测定

雄性小鼠54只，体重约20g，随机分成9组，每组6只，包括：混合染毒低、中、高剂量组(40，400，4000mg/kg)，单一剂量组(DBP，4000mg/kg)，干预复合高剂量组，干预对照组(儿茶素，25mg/kg)，阳性对照组(CP)，空白组(植物油)，正常组。染毒组连续染毒5天，阳性对照组于第四、第五两天给予CP 40mg/kg，每天一次。各组小鼠在染毒后正常饲养至35天，脱颈椎致死，取出其双侧附睾放入盛有300μl生理盐水的离心管中制成涂片并染色，于显微镜下观察。每只小鼠观察1000个精子，按Wyrobeks的分类标准，记录无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾等数目并统计畸形率。应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，平均值以标准差反映离散水平，两组之间差异显著性进行t检验分析。

1.3雄性小鼠30天染毒及取材