[发明专利]脂蛋白(a)检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种医学检测试剂盒，具体涉及一种运用胶乳增强免疫比浊法测定人血清中脂蛋白(a)的试剂盒。

背景技术

脂蛋白(a)(Lipoprotein(a),LP(a))是与低密度脂蛋白相似的一种脂蛋白，其核心部分除了含有和低密度脂蛋白组分相似的甘油三酯，磷脂，胆固醇，胆固醇酯等脂质和载脂蛋白B100(ApoB100)外，还含有低密度脂蛋白中没有的载脂蛋白(a)(Apolipoprotein(a),Apo(a))。因此，通常医学上通过检测载脂蛋白(a)的浓度来反应脂蛋白(a)在血清中的含量。载脂蛋白(a)的cDNA序列在1993已经被报道，从而推测出蛋白质的一级结构，发现它的相对分子质量为（250-800kDa），含有4529个氨基酸。载脂蛋白(a)通过双硫键联结于载脂蛋白B100。研究发现脂蛋白(a)在个体血清中浓度相对稳定，除遗传因素外，几乎不受年龄，性别，吸烟，饮食，脂代谢，药物，环境等因素的影响。因此脂蛋白(a)是一种比较稳定的生物标记物，大量的基础研究和临床研究表现脂蛋白(a)与动脉硬化性脑血管疾病的发生相关，是心脑血管疾病，糖尿病，肝胆疾病，终末期肾病及妇科等疾病的重要危险因素。

目前，已知的检测脂蛋白(a)浓度的方法有酶联免疫法，放射免疫法，荧光免疫测定法等检测方法，上述的测定方法的操作比较复杂，检测用时长，过度浪费资源的缺点，不适合做常规检测。中国国家知识产权局网站上公开了一种脂蛋白(a)检测试剂盒检测，采用胶乳增强免疫透射比浊法，具有稳定性好，检测方便的优点，但是人血清中含有的类风湿因子对试剂盒检测值易产生了干扰，使得个别类风湿因子含量高的血清产生了测量值出现假阳性。此外现有的胶乳增强免疫透射比浊法通过物理吸附法把多克隆抗体标记在不带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒上，该不带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒的稳定性比较差，而且物理吸附的效果也不好，很容易会造成抗体从胶乳颗粒表面脱落。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种脂蛋白(a)检测试剂盒，它通过化学交联法把多克隆抗体标记在表面带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒上的胶乳增强免疫透射比浊法，具有检测灵敏度高，准确度高，精密度好，检测范围内线性好，稳定性好，生产成本低，空白吸光度低且具有抗干扰性能的优点。

本发明所采用的技术方案为：一种脂蛋白(a)检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2及参考校准品，其中试剂R1为HEPES缓冲体系，包括：0.5～10g/LHEPES、2～20g/L氯化纳、0.05～1.0ml/L吐温-20、0.1～2g/L牛血清蛋白、5～25g/L聚乙二醇-6000、1～5g/L EDTA、0.1～2g/L Proclin300；试剂R2包括：采用化学交联法制备得到的包被有抗人载脂蛋白(a)多克隆抗体的表面带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒混合物，0.5～10g/L HEPES缓冲液，阿斯巴甜，所述阿斯巴甜与试剂R2的重量体积比为0.01～0.5：100（g/L）；参考校准品：为添加人重组载脂蛋白(a)的人血清或者类似血清基质的液体，所述人重组载脂蛋白(a)蛋白由大肠杆菌或者酵母表达，经过亲和、离子交换纯化后得到。

上述类似血清基质的液体即类似人血清基质的溶液，如0.1%BSA，0.9%NaCl，0.2%NaN₃，15mM磷酸盐缓冲液（pH7.5）。

作为优选，所述试剂R1为1～5g/L HEPES、5～15g/L氯化纳、0.1～0.5ml/L吐温-20、0.5～1.5g/L牛血清蛋白、10～20g/L聚乙二醇-6000、2～3g/L EDTA、0.2～1g/L Proclin300。

进一步地，所述试剂R1为1.5g/L HEPES、9g/L氯化纳、0.2ml/L吐温-20、1g/L牛血清蛋白、10g/L聚乙二醇-6000、2.9g/L EDTA、0.9g/L Proclin300。

进一步地，所述HEPES的pH值为5.5～8.5。

进一步地，所述HEPES的pH值为7.0～7.8。

进一步地，所述试剂R1和试剂R2的容积比为4:1。

进一步地，所述试剂R2中聚苯乙烯胶乳颗粒混合物的平均粒径为60～300nm。

进一步地，所述试剂R2中聚苯乙烯胶乳颗粒混合物的平均粒径为100～200nm。

进一步地，所述试剂R2中阿斯巴甜与试剂R2的重量体积比为0.05～0.2：100（g/L）。

更进一步地，所述抗人载脂蛋白(a)多克隆抗体为羊抗人载脂蛋白(a)多克隆抗体。