[发明专利]一种IgA抗体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测抗I2IgA抗体的免疫分析试剂盒。

背景技术

克隆病(Crohn’s disease，CD)是一种病因复杂的肠道慢性非特异性炎症。已经有多种细菌和病毒被证明与CD病有关。在众多的CD发病机理中，机体对某种正常肠道细菌的某种抗原或者正常食物中的成分过激反应是被广泛认可的机理之一。已经被证明的与CD发病机理有关的抗原包括大肠杆菌外膜孔道蛋白(outer membrance protein C，OmpC)、酵母细胞壁的甘露聚糖等。I2是一种在活动性CD患者病变肠黏膜上发现的蛋白，通过氨基酸序列分析，发现I2是一种肠道正常菌荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)pfiT基因的一段序列。研究表明，大约有50％CD患者血清抗I2的IgA抗体阳性，而在正常人和非CD肠道疾病患者中的抗I2的IgA抗体极少被检测到。因此，抗I2的IgA抗体检测是CD诊断的有效指标之一。

目前没有I2抗体免疫分析试剂盒，文献上曾报道用重组I2蛋白的方法获得I2蛋白，然后用放免或直接ELISA方法检测。本发明的一个方面，用合成I2多肽包被微孔板代替文献方法的I2蛋白包被，包被效率更高，质量更可控。本发明的另一方面，在免疫分析时，用化学发光法底物代替了文献所用的TMB显色系统，化学发光法比普通ELISA法检测限更低，更灵敏。因此，本发明与现有方法相比，具有更灵敏、更稳定的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种更灵敏、更稳定的检测I2抗体的免疫分析试剂盒，具体来说是检测人抗I2的IgA抗体的免疫分析试剂盒。

本发明提供了一种检测I2IgA抗体的免疫分析试剂盒，该试剂盒包括：包被有I2多肽的微孔板、辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体、阴性对照品、阳性对照品、化学发光底物液、浓缩洗涤液、抗体稀释液。其中包被微孔板的I2多肽是用人工氨基酸合成的方法获得，至少含有SEQ1-4一个序列。

所述的酶标记抗人IgA抗体采用化学方法偶联得到，标记酶为辣根过氧化物酶，所述偶联方法为改良过的碘酸钠法。

用于制备所述微孔板的固相材料为黑色避光材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。载体的形式是微量反应板凹孔。

所述的浓缩洗涤液为0.05％tween20的磷酸盐缓冲液。所述的化学发光底物液由A液和显色剂B液组成(例如，体积比为1∶1)，显色剂A液为过氧化氢或过氧化脲，显色剂B液为鲁米诺及其增强剂。所述的样品稀释液为含含0.5％BSA的磷酸盐或碳酸盐缓冲液，所述的抗体稀释也为含0.5％BSA的磷酸盐或碳酸盐缓冲液。

本发明的另一方面，提供了一种检测血清或血浆中抗I2IgA抗体的方法，包括步骤：

(1)样品前处理：

(2)用权利要求1-9任一所述的试剂盒进行检测，向I2多肽包被的微孔板孔中加入待测样品溶液或对照品，孵育后洗涤拍干，再加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，孵育后洗涤拍干，加入化学发光底物液、终止液，用生化仪或化学发光仪测定吸光度值；

(3)分析检测结果。

本发明试剂盒的检测原理为：

将I2多肽包被在固相载体上，加入待检测样品或对照品，样品或对照品中的抗I2抗体(所有Ig，包括IgG、IgA、IgE、IgM等)就跟固相载体上的I2多肽结合，形成抗原-抗体复合物，用洗涤液去除无关的成分，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，酶标抗体与微孔板上的抗原-IgA抗体结合，形成抗原-IgA抗体-酶标抗体复合物，通过洗涤出去未结合的酶标记物，显色后终止，测定样品的吸光度值，该值与样品中含抗I2的IgA抗体的量呈正相关，与阴性对照品和阳性对照品检测所得的值进行比较即可得出样品中是否含有抗I2的IgA抗体含量范围。

附图说明：

附图1：SEQ：1

附图2：SEQ：2

附图3：SEQ：3

附图4：SEQ：4

提供下述实施例是为了更好地理解本发明，而不是对本发明的内容和保护范围构成任何限制。

实施例1不同序列I2多肽包被的比较

SEQ：1、SEQ：2、SEQ：3、SEQ：4多肽由上海宾泰医药科技合成，纯度90％以上。