[发明专利]中枢神经系统药物研究的原代同源三细胞四维模型及构建方法

权利要求书

1.一种中枢神经系统药物研究的原代同源三细胞四维模型，其特征在于：在24孔培养板（1）中有神经元细胞培养物（2）及神经元细胞培养基（3），在神经元细胞培养基（3）中插有Transwell Insert（4），所述Transwell Insert（4）的滤膜内室面涂有胶原蛋白Ⅳ（5），在Transwell Insert（4）的内室面有毛细血管内皮细胞培养物（6），在Transwell Insert（4）的外室面有星形胶质细胞培养物（7），所述星形胶质细胞培养物（7）的突起通过Transwell Insert（4）的滤膜孔径（8）穿向毛细血管内皮细胞培养物（6），所述神经元细胞培养基（3）的组分及体积百分比如下：98% 神经元细胞基础培养基、1% 双抗、1% L-谷氨酰胺。

2.一种如权利要求1所述中枢神经系统药物研究的原代同源三细胞四维模型的构建方法，其特征在于按如下步骤进行：

a. 分别提取同一种属同一部位的星形胶质细胞、毛细血管内皮细胞及神经元细胞并分别进行原代培养； 

b. 在Transwell Insert滤膜内室面涂胶原蛋白Ⅳ，备用；

c. 先用质量浓度为0.25%的胰蛋白酶消化原代培养9天的星形胶质细胞，用星形胶质细胞完全培养基重悬至密度为1×10⁵个/ml，取100 μl种植于的Transwell Insert的外室面，倒置于无菌容器中，放入37℃，5% CO₂培养箱培养至细胞贴壁，然后将Transwell Insert正置于24孔培养板中，外室与内室都加入含有10%胎牛血清的DMEM培养基，放入37℃，5% CO₂ 培养箱内继续培养，倒置培养及正置培养共2天；其次用质量浓度为0.05%的胰蛋白酶消化原代培养5天的毛细血管内皮细胞，用毛细血管内皮细胞完全培养基重悬至密度为1×10⁵ 个/ml，吸出Transwell Insert内室中DMEM培养基，取200 μl毛细血管内皮细胞悬液种植于已生长有大脑皮质星形胶质细胞的Transwell Insert的内室面，然后再将Transwell Insert正置于24孔培养板中，放入37℃，5% CO₂培养箱内继续培养2天；最后将在24孔培养板中原代培养6天的神经元细胞的完全培养基更换为所述神经元细胞培养基，再将培养有毛细血管内皮细胞与星形胶质细胞的Tanswell Insert插入神经元细胞培养基中，放入37℃，5% CO₂ 培养箱内培养1天。