[发明专利]重组人胰岛素原的复性与纯化方法

权利要求书

1.重组人胰岛素原的复性与纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）在大肠杆菌中表达的重组人胰岛素原的菌体细胞经离心、超声破碎后分别用缓冲液I和II洗涤、离心溶解于强变性缓冲液中得到含有重组人胰岛素原的变性抽提液；

所述缓冲液I为10～20  mmol/L PBS，0.5～1 mmol/L EDTA，pH 7.0～7.5；

所述缓冲液II为0.5～2.0 mol/L脲，0.5～1 mmol/L EDTA，0.5～1.0 mol/L NaCl，10～20 mmol/L PBS，pH 7.0～7.5；

所述的强变性缓冲液为6.0～8.0 mol/L脲，10～20mmol/LDTT，0.5～1mmol/LEDTA，pH7.0～8.0；或6～7 mol/L盐酸胍，10～20mmol/LDTT，0.5～1mmol/LEDTA，pH7.0～8.0；

（2）将含有重组人胰岛素原的变性抽提液直接进样到流动相A平衡的色谱柱，然后用含20～40 mmol/LPBS，pH6.0～7.0的流动相B线性梯度洗脱，流速为0.3～0.7mL/min，收集目标峰色谱馏分得到复性与纯化含重组人胰岛素原的色谱馏分；

流动相A为：20～40 mmol/LPBS，0～8.0 mol/L脲，pH6.0～7.0；

（3）将步骤（2）含重组人胰岛素原的色谱馏分直接进样，用0～10 mmol/LPBS，pH6.0～7.0的流动相平衡的色谱柱进一步脱盐，持续洗脱20～40 min，流速0.5～1 mL/min，得到重组人胰岛素原。

2.根据权利要求1所述的重组人胰岛素原的复性与纯化方法，其特征在于：

步骤（2）中色谱柱为TSK gel G2000SWXL型或Superde×200 10/300GL型。

3.根据权利要求1所述的重组人胰岛素原的复性与纯化方法，其特征在于：步骤（2）中所述洗脱方式采用流动相A平衡后，用流动相B线性梯度洗脱20～40 min，延长5～10 min。

4.根据权利要求1所述的重组人胰岛素原的复性与纯化方法，其特征在于：步骤（3）中所述色谱柱为HiTrap Desalting column。