[发明专利]一种分离检测阿奇霉素及其杂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物检测领域，尤其涉及一种分离检测阿奇霉素及其杂质的方法。

背景技术

阿奇霉素（Azithromycin）是通过红霉素A上9-酮基肟化后经贝克曼重排、还原、N-甲基化反应合成得到的15元氮杂大环内酯类化合物，最初是由普利瓦（Pliva）公司于二十世纪七十年代末开发，后转让给辉瑞（Pfizer）公司，以Zithromax(希舒美)为商品名在全球销售。阿奇霉素的抗菌机理与红霉素相似，通过与细菌细胞中核糖体50S亚基结合，阻碍细菌转肽过程，抑制依赖于RNA的蛋白质的合成而达到抗菌作用。与红霉素比较，阿奇霉素具有更广泛的抗菌谱，能抑制多种革兰阳性球菌、支原体、衣原体及嗜肺军团菌，尤其是对一些重要的革兰阴性杆菌如流感嗜血杆菌等具有良好的抗菌活性，弥补了大环内酯类对嗜血杆菌作用差的不足。

杂质检查是药品安全性评价的一个重要指标。由于阿奇霉素为半合成产品，起始原料以及合成过程中容易产生较多杂质，加之对酸、碱、热、氧化等因素较敏感等原因，使得对其杂质控制较其他抗生素品种更为复杂。目前国内外药典及文献报道，对阿奇霉素及其杂质的测定多采用HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测）的方法，由于其结构属于大环内酯类，紫外仅有末端吸收，因而检测灵敏度较低。美国药典(USP34版)对该项检查应用到了电化学检测器，铝基质色谱柱(USP中L29色谱柱)或氧化锆色谱柱(USP中L49色谱柱)，此试验条件在国内也不易推广使用。欧洲药典（7.0）所采用的方法柱温为60℃，所设柱温较高，对色谱柱的损耗很大，对绝大多数色谱柱来说已达到柱温极限。

阿奇霉素及其杂质的结构如式1及表1所示。

式1

表1阿奇霉素及其11个杂质

其中，二脱氧甲基已糖（即克拉定糖，cladinose）的结构式如下：

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有的分离检测阿奇霉素及其杂质的方法检测灵敏度低，采用的色谱柱所设柱温较高，对色谱柱的损耗大的缺陷，提供了一种分离检测阿奇霉素及其杂质的方法。该方法检测灵敏度高，采用的色谱柱所设柱温低，操作简捷方便。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种分离检测阿奇霉素及其杂质的方法，其包括下述步骤：将阿奇霉素样品溶于乙腈中，或溶于流动相A与流动相B按体积比为70:30的溶液中，形成样品溶液，用液相色谱-质谱法分离检测阿奇霉素及其杂质，即可；

其中，液相色谱-质谱法的条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A的配制：体积分数为0.3%的甲酸水溶液，用氨水调节其pH值至8.20；流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:1的混合溶液；以流动相A与流动相B按照下述体积比进行线性梯度洗脱：0min:70%A+30%B→30min:70%A+30%B→50min:45%A+55%B→53min:45%A+55%B→65min:30%A+70%B；流速为1.0mL/min；紫外检测器的检测波长为210-215nm；经过紫外检测器后的流份的1/5～1/3进入质谱仪检测。

其中，所述的样品溶液的质量浓度较佳地为0.5-2mg/mL，更佳地为1mg/mL。

其中，所述的样品溶液的进样量较佳地为5～20μL，更佳地为10μL。

其中，所述的样品溶液在进样前较佳地进行超声溶解。

其中，所述的色谱柱较佳地为规格5μm，4.6mm×250mm的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；更佳地为SHISEIDO XBridge^TM Shield RP18柱、CAPCELL PAK C18MG II柱和Waters XBridge^TM C18色谱柱中的一种，最佳地为Waters XBridge^TM C18色谱柱。

其中，所述的色谱柱的柱温较佳地为35-45℃，更佳地为40℃。

其中，所述的质谱仪可为本领域常规使用的各种类型的质谱仪，较佳地为Waters micromass ZQ质谱仪，其工作参数较佳地为喷雾高压（即毛细管电压）：3kV；锥孔电压：30V；源温100℃；脱溶剂温度250℃；全扫描范围m/z250～1000。

本发明中的阿奇霉素样品可为本领域常规的阿奇霉素待测样品，一般包括阿奇霉素和阿奇霉素杂质。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。