[发明专利]一株能促进木麻黄根系生长作用的内生真菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株能促进木麻黄根系生长作用的内生真菌。

背景技术

植物内生菌的研究始于19世纪末，Vogl从黑麦草Lolium temulentum L.种子中分离出第一株内生菌^[1]。但真正开始大量研究植株中的内生菌起始于上世纪八十年代，主要是在温带地区、亚热带地区和热带地区的植被中开展研究。

前人从大部分植物中都能分离出内生菌，因此可以推测内生菌在植株中是普遍存在的。在全世界范围内至少在80多个属290多种的禾本科农作物中发现了内生菌^[2]。目前从植物中分离的内生菌根据其具有的独特功能可以分为：固氮菌、固钾菌、固磷菌等植物促生菌^[3~4]、具有抗病虫害的生防菌^[5~8]和具有促进植物对不良环境的修复能力的抗性菌。在促进光合作用方面的内生菌报道极少，仅有在水稻上发现一种具有光合作用能力的内生菌，它也被证明是豆荚Aeschynomene^[9]茎瘤中固氮菌Bredyrhizobium的一个株系。

木麻黄科植物是兼有弗兰克氏菌菌（Frankia）、内生菌根菌和外生菌根菌的共生营养型植物，因此，关于木麻黄真菌学方面的研究方向目前较多涉及弗兰克氏菌（Frankia）、青枯菌（Solanasearum）、青枯假单胞杆菌(Pseudomonas soIanacearum Smith)等，虽然木麻黄人工接种菌根菌后的促生效果已毋庸置疑，但是仅停滞于根瘤菌根菌的研究，木麻黄内生真菌方面的研究尚未见报道^[10-11]。前人的研究中应用菌株，多为外生真菌，同时也没有从促进根系生长作用的根本因素去寻找内生真菌，提高其科学性和可靠性^[12]。证实能促进根系生长作用的内生菌方面尚未见报道。

根系是所有植株体的重要组成部分，植物地下部分根群对水分、养分的吸收能力同地上部分的光合作用效率一样，对植物的正常生长发育起到了至关重要的作用，植株对水分和养分获取的能力取决于根系的形态，其中重要的根系形态指标有根系长度、根系表面积和根系生物量等，因此，植物根系的研究已作为生态学研究的重要内容^[13~14]。

发明内容

本发明的目的在于提供一株能促进木麻黄根系生长作用的内生真菌。

本发明提供的一株能促进木麻黄根系生长作用的内生真菌，所述功能内生真菌为叶点霉（Phyllosticta sp.）木麻黄根际真菌15，已于2012年6月28日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No. 6307。

该菌的分离、纯化包括：

A、材料：将采集得到不同年份的根、枝条、鳞状叶小枝分成三个部分，用自来水清洗干净，分装到自封袋内，于4℃冰箱保存；

B、消毒：70%酒精浸泡30s——无菌水浸洗一次——10%次氯酸钠浸泡7min——无菌水浸洗一次。当样品最后一次浸洗后的水盛于灭菌的小烧杯中，在平板上划线作为对照，以检验样品的消毒是否彻底，若干天后如有菌落生成，则表明样品表面消毒不彻底，需继续调整消毒方法^[15-17]；

C、接种部位的选择：鳞状叶小枝：分取植株的上、中、下三个部分的鳞状叶小枝，每个鳞状叶小枝又分为枝尖部、枝中部和枝基部3个处理；枝条：上中下分为3部位，其中第3部位为枝茎交接处；根部：分为根尖和根基2个部分；

D 、接种：将消毒后的外植体用接种刀切开，铺放在培养基表面，于28℃恒温培养箱内培养5—7天后观察菌落生长状况。有的菌株繁殖迅速，可先将其产生的菌株进行分离纯化；生长缓慢且数量较少的菌株可延长观察时间，直到其生长稳定后纯化。

固体培养：使用改良马丁固体培养基，配方为蛋白胨 5.0g/L、酵母浸出粉2.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾1.0g/L、硫酸镁0.5g/L、琼脂14.0g/L、其它为无菌水，pH值6.4±0.2，培养温度为28℃，培养方式为平板培养，培养时间为48h；

E、将分离繁殖出的不同种类的内生真菌接入平板培养基进行纯化，经过2-3次点接纯化、转接后得到单一菌种的上述的Phyllostic-ta sp.功能菌株；