[发明专利]一株链霉菌YT027及其应用

说明书

技术领域

本发明属于农产品贮藏保鲜技术领域，具体地，涉及一种链霉菌菌株YT027及其应用，专用于贮藏期芋头疫病的无公害生物防治。

背景技术

芋头疫病是由芋疫霉（Phytophthora colocasiae Racib.）引起的芋头真菌病害。虽然芋头疫病是芋头栽培期的主要病害之一，但是芋头采收时产生大量伤口，并且贮藏早期的环境湿度较大，呼吸旺盛，温度较高，芋头表面粘附的芋疫霉病原菌及其孢子容易侵染发病，造成贮藏期芋头的变质和腐烂。特别是其与细菌性软腐病混合发作，危害更大。

贮藏期芋头疫病的有效防治是延长芋头贮藏期，保持其品质，提高其商品价值的一个重要方面。目前，主要利用登记于田间的化学农药来防治贮藏期病害，可供选择的贮藏期专用农药还不多见。近年来，随着人们对食品安全和环境质量要求的日益提高，化学农药在采后农产品上的应用被严格限制或禁止，这就促使科研工作者寻求更加安全的采后农产品贮藏保鲜技术。基于微生物的生物防控技术被认为是未来农产品贮藏保鲜技术的发展方向之一，例如链霉菌（Streptomyces species）、芽孢杆菌（Bacillus species）和酵母。

链霉菌（Streptomyces species）属于高等放线菌，广泛分布于各类土壤中，有发育良好的分枝菌丝。目前医药和农业生产上应用的抗生素90%由本属菌产生，例如链霉素、井冈霉素、四环素、新霉素等。大量研究报道表明，链霉菌的次生代谢产物对多种植物病原真菌具有潜在的拮抗活性，能够显著抑制病原菌的生长，甚至杀死病原菌，从而延缓或阻止病害的发生。从芋头生长或贮藏的环境中筛选对芋疫霉等病原真菌具有良好生防效果的生防菌，将该生防菌发酵液或发酵次生代谢产物应用于贮藏期芋头疫病的生物防治，将能够避免或降低化学农药的危害，延长芋头的货架供应期，维持其品质，提高其商品价值，促进芋头种植业的发展和商业化流通。但是目前还未见到关于利用链霉菌防治芋头疫病，包括贮藏期芋头疫病的报告。

发明内容

本发明的目的在于提供一种链霉菌（Streptomyces sp.）YT027及其对贮藏期芋头疫病生物防控的应用。

本发明提供的菌株为链霉菌（Streptomyces sp.）菌株，是从贮藏期芋头表面分离获得，采用菌体形态观察、菌落形态观察和16S rRNA序列测定相结合的方法，将该菌株鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.），并将其命名为YT027。该菌株已于2013年1月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），分类命名为Streptomyces sp.，菌种保藏编号为CGMCC No. 7196。

链霉菌菌株YT027在2YT固体培养基平板上，30℃条件下培养36 h后的菌落特征是：单菌落为乳黄色或略呈浅淡黄色，圆形，直径1.0 mm ~ 2 mm，表面干燥，边缘完整，连成片的菌落表面皱褶，菌落背面呈米黄色。其菌体细胞形态为：菌丝纤细，分枝。所使用的2YT固体培养基成分为：胰蛋白胨 17 g，酵母浸膏10 g，NaCl 5 g，琼脂 15 g，蒸馏水定容至1000 mL，pH 7.0，121℃条件下灭菌20 min。

本发明提供了所述链霉菌YT027的发酵产物。

 本发明提供了一种链霉菌YT027或其发酵产物在防治贮藏期芋头疫病中的应用。

 本发明提供了一种生防菌剂的制备方法，包括以下步骤:

1)      活化培养：取本发明链霉菌菌株YT027的菌种，划线接种至新鲜2YT固体平板上，在25-32℃条件下活化培养24-36 h;

2)      种子液制备：利用灭菌牙签挑取一个单菌落接种到一个含有50 mL 2YT液体培养基的250 mL锥形瓶中，25-32℃下振荡培养36-48 h，振荡频率为100-200 r/min；

3)      生防菌液的制备：将步骤2）所得的种子液以1-10%（v/v）的比列接种于发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25-32℃，培养基的初始pH为6.3-7.5，以通气比0.2:1到2.5:1之间进行发酵通气，搅拌速度为75-180 r/min，发酵时间为24-48 h。其中通气比：指每分钟通过发酵液的空气体积与发酵液体积之比。