[发明专利]一种远缘杂交和多倍体化选育构树桑树新杂种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种远缘杂交和多倍体化选育构树桑树新杂种的方法，属于现代农业的树木育种技术领域。

背景技术

构树是桑科(Moraceae)构树属落叶乔灌木，根系发达，韧皮纤维极发达，其适应性极强，极耐干旱、瘠薄和湿热，极少有病虫害，而且叶含丰富蛋白质，被誉为“生态恢复先锋”，并广泛用于饲料工业，但其木质较差，主干性不明显，局限了其在木材市场和行道园林上的应用。而桑树作为我国重要的经济林木之一,材质优良、主干性明显，其最主要价值在于养蚕和高档家具市场用材，但它在抗病虫害方面表现较差，易被桑天牛等害虫取食，其在生态适应性上也存在一定的局限。有必要对栽培桑树和构树进行生殖工程性的品种改良。

本方法利用生殖工程技术，突破栽培桑树与野生构树杂交障碍，通过构树和栽培桑树的远缘杂交和多倍体化，充分整合二者之间的优势，将两者的优异基因结合在远缘杂交多倍体杂种中，培育出丰产速生、材质优良、适应性强的优良经济型新树种。既为桑树和构树育种开创新途径，也为新杂种广泛应用于木材加工、行道园林、饲料工业和生态恢复工程创造良好条件。

发明内容

本发明的目的是提出一种远缘杂交和多倍体化选育构树和桑树新杂种的方法,是通过生殖工程性品种改良技术，对远缘杂种进行胚胎工程、组织培养技术，建立获得杂交果、诱导杂交果愈伤组织加倍形成远缘杂交多倍体杂种系，以用于解决现有构树的主干不明，材质较差和桑树适应性不强的问题。

本发明的技术方案为：a.远缘杂种果实的获得；b.杂交果的愈伤组织诱导；c.杂交果愈伤组织的秋水仙素处理；d.处理后愈伤组织的恢复培养；e.愈伤组织分化出芽苗；f.芽苗分化出根；g.组培植株的移植；h.成活植株的比较观察与选择；i.选株的无性扩繁成稳定品种（系）。

本发明的具体过程为：

a.远缘杂种果实的获得

远缘杂种是以优良桑树品种和野生构树为亲本，利用构树桑树雌雄异株的特性，选用雌构树为母本进行套袋，父本桑树的花粉采集于初花期，取出花药于干燥处晾干，待花药开裂、花粉散出后将花药用纸包好，放在底层有干燥剂的干燥器中储存。在构树品种始花至终花、柱头上出现粘液时，分2次～3 次授粉（用毛笔挑花粉散点于带粘液的柱头上），授粉后每隔一天对杂交果喷施激素（50mg/L-100mg/lGA3 + 20mg/L-30mg/L NAA）2周后,获得杂交果；

b.杂交果的愈伤组织诱导

取回杂交果经流水冲净后，先在 0.1%新洁尔灭（5%）溶液中浸泡 30 min，然后用0.1%升汞消毒8～10min ，再用无菌水洗 3次～4 次。将消毒后的杂交果，放在超净工作台上除去果实外绒毛，切成1/2-1/4大小并保留0.5cm-0.8cm叶柄。再将切好的果子切割面朝下水平放入到杂交果愈伤组织诱导培养基中，置于20001X光照10hr/d，25℃条件下培养。20天-25天果实发生膨大并在果实中心处或切面出现紧密的乳白色团状愈伤组织；

所述杂交果的愈伤组织诱导培养基配方为：MS +1.0mg/L- 2.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L-0.5mg/L NAA + 4%蔗糖 + 0.75% 琼脂 ，pH5.8；

c．杂交果愈伤组织的秋水仙素处理

当杂交果愈伤组织生长到40天-45天时，将愈伤组织置于添加500mg/L～750mg/L秋水仙素，不加琼脂的杂交果愈伤组织加倍培养液中，放在温室（26℃）摇床上，在100转～120转/分钟的速度下旋转培养处理48hr～60hr；

所述加倍培养基配方为：MS +1.0mg/L- 2.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L-0.5mg/L NAA +500mg/L～750mg/L秋水仙素+  4% 蔗糖 ，pH5.8；

d．处理后愈伤组织的恢复培养

杂交果愈伤组织加倍处理完毕，取出愈伤组织经无菌水冲洗和吸干表面水分后，接种到杂交果愈伤组织诱导培养基上，恢复培养7天；

e．愈伤组织分化出芽苗

经恢复培养的愈伤组织接种到分化培养基中分化培养，15天-20天后愈伤组织出现绿芽，25天-35天后陆续分化出芽苗，并可见丛苗出现；

所述分化培养基配方为：MS + 2.0mg/L～3.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L-0.3mg/L NAA + 3%蔗糖 + 0.75% 琼脂,pH5.8；

f．芽苗分化出根