[发明专利]一种万象组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术、植物茎尖培养技术，主要是一种万象组织培养的方法。

背景技术

万象(Haworthia maughanii)，又名毛汉十二卷，为百合科(Liliaceae)、十二卷属（Haworthia）多年生多浆植物,原产南非，喜温暖、干燥和阳光充足的环境，耐干旱，怕积水、忌烈日曝晒，不耐寒冷。万象整株植株无茎，条状肉质叶从基部斜出，呈松散的莲座状排列，叶顶端截面透明或半透明，有些品种叶顶端截面上还有花纹。万象品种多样，株型小巧、奇特，观赏价值较高，目前主要用小盆栽培，适合阳台、窗台和书桌点缀、观赏，具有较大的市场前景。

万象的繁殖常用播种、分株、插叶、插根等方式，但是传统繁殖方式受季节、年限及栽培技术限制严重，每年繁殖数量有限，不利用万象的推广。植物组织培养技术被认为是目前最高效的植物种苗快繁技术手段，目前，国内利用植物组培技术对万象进行快速繁殖的文献报道极少，产业化生产体系尚未建立。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种万象组织培养的方法，建立良好的万象组培再生体系，为万象种苗产业化生产、新品种创制及品质遗传改良等做好技术支持。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种万象组织培养的方法，该方法包括以下几个步骤：

1)外植体的选取及处理：选取万象穗状花序作为起始材料，收集到的万象穗状花序剥去小穗基部萼片，再将整个花序切成0.5cm长短，作为组培用外植体；

2）愈伤诱导：在超净工作台上，将经过表面消毒的外植体在转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于初代培养基MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中进行初代培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

3）不定芽诱导：将获得的增殖良好的万象愈伤材料转移至诱导培养基MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中，进行不定芽，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4）不定芽增殖：在无菌工作台上，将愈伤诱导获得的1～1.5cm高的不定芽2～3个一丛，利用无菌的解剖刀将基部轻轻造成一些伤口，接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽增殖培养基为MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

5）壮苗培养：高生长到1.5～2cm的丛生不定芽2～3个一丛，接种到壮苗培养基MS+6-BA0.1～0.2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L中培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

6）不定芽生根诱导：从基部将高生长到3～5cm的丛生不定芽分开成单个不定芽，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

7）组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出3～5条1～2cm的不定根后，将组培移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，完成组培苗移栽前驯化，然后将组培苗从培养瓶取出，洗净组培苗表面琼脂，晾至表皮稍红,，栽入基质中，保湿60％-80％以上培养15d，然后在温室中正常培养。

愈伤诱导、不定芽诱导及增殖、壮苗培养、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.7～5.8。

本发明有益的效果是：

1、通过组织培养技术进行万象种苗快繁，生产不受地区、季节、气候及母株生长年限的限制，便于工厂化育苗，可根据订单进行生产，生产时间及规模可控，为万象的推广应用提供充足的优质种苗保障。

2、繁殖系数达到2～2.5，生根率100％，移栽成活率98％以上，达到种苗工厂化育苗生产的要求，目前尚未见关于万象组织培养的文献报道。