[发明专利]应用于水体重金属检测的检测液及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及水体检测环境领域，具体涉及一种应用于水体重金属检测的检测液及其使用方法。 

背景技术

目前由于矿产开采、冶炼加工、机械制造以及仪器仪表、有机物合成等工业中的重金属废水排放，造成不少由重金属（如铅、汞、镉、钴等）引起的水环境污染。重金属废水是对环境污染最严重和对人类危害最大的工业废水之一，因此铅、汞、镉、钴等离子的浓度也成为了水环境监测的重要指标。通过检测水体中铅、汞、镉、钴等离子的浓度，从而大致反应出水体的重金属污染程度。传统的重金属监测的标准分析方法主要以分光光度法和原子吸收分光光度法为主，利用被测物质在特定波长处或一定波长范围内的特定吸收对该物质进行定性和定量分析。随时科技技术的不断进步，国内应用较多的其他方法还有原子吸收法、原子荧光法以及较先进的电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)、电感耦合等离子体-质谱法(ICP-MS)等分析方法。针对此类大型设备昂贵，操作复杂、维护量大、成本较高，不易实现现场检测等弊端。 

发明内容

本发明提供一种用于检测水体中重金属含量的检测液，此检测液在检测水体中重金属离子时具有操作简单、速度快、灵敏度高、线性范围宽、使用成本低、能够实现现场检测等优点；同时，还提供一种应用上述检测液的检测水体重金属含量的方法。 

为达到上述目的，本发明采用的第一技术方案是：一种应用于水体重金属检测的检测液，所述荧光检测液包括Eu³⁺盐修饰的木瓜蛋白酶和荧光染料XL665修饰的木瓜蛋白酶； 

所述Eu³⁺盐修饰的木瓜蛋白酶通过以下工艺获得：包括：

将含有Eu³⁺离子的铕穴状化合物与300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺溶液和300nM 的N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液搅拌混合活化30min形成第一活化混合液；

将50nM木瓜蛋白酶与所述第一活化混合液搅拌混合在20℃~30℃的条件下偶联反应形成Eu³⁺盐修饰的木瓜蛋白酶；

所述荧光染料XL665修饰的木瓜蛋白酶通过以下工艺获得：包括：

将荧光染料XL665或荧光染料d2与300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺溶液和300nM 的N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液搅拌混合活化30min形成第二活化混合液；

将50nM木瓜蛋白酶与所述第二活化混合液搅拌混合在20℃~30℃的条件下偶联反应形成荧光染料XL665修饰的木瓜蛋白酶；

上述第一技术方案中的进一步改进方案如下：

1. 上述方案中，所述Eu³⁺盐修饰的木瓜蛋白酶经透析袋过滤获得纯化后的Eu³⁺盐修饰的木瓜蛋白酶。

2. 上述方案中，所述XL665修饰的木瓜蛋白酶经透析袋过滤获得纯化后的XL665修饰的木瓜蛋白酶。 

3. 上述方案中，所述偶联反应的时间为2 h。 

4. 上述方案中，所述偶联反应的温度为25℃。 

本发明采用的第二技术方案是：一种应用权利要求1所述检测液的检测水体中重金属含量的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： 

步骤1. 将所述检测液加入待检测水溶液后经的激发光源激发从而检测在620nm和665nm波长的荧光发射强度，并计算665nm荧光发射强度与620nm荧光发射强度比值获得待测液荧光比值；

步骤2. 将待测液荧光比值与标准荧光曲线对比从而获得待检测水溶液中重金属离子的浓度，所述标准荧光曲线为基于若干种已知重金属浓度的标准溶液和所述荧光检测液混合后获得的液荧光比值标定出的荧光曲线。

上述第二技术方案中的进一步改进方案如下： 

1. 上述方案中，所述已知重金属浓度的标准溶液包括0.1 nM、1 nM 、10 nM、100 nM和1 nM的标准溶液。

2. 上述方案中，所述重金属包括Hg²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺。 

3. 上述方案中，所述激发光源产生的光源波长为360nm。 

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：