[发明专利]一种倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种倍半萜类和姜黄素类成分同时检测的方法，特别是莪术中倍半萜类和姜黄素类成分的含量检测。

背景技术

莪术为姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Valeton)、广西莪术(Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)或温郁金(Curcuma wenyujin Y·H·Chen et C·Ling)的干燥根茎，具有破气行血、消积止痛的功效和抗癌、抗病毒、抗炎、抗凝血、抗氧化和保肝等生理作用。

根据文献报道莪术油具有抗病毒和抗肿瘤活性，莪术油中的倍半萜类（包括莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯等）则是其主要活性成分。同时莪术中的姜黄素类成分（包括双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素）也具有抗病毒和抗肿瘤活性。

目前，GC–MS,HPLC,LC-MS,LC-MS/MS已经应用于定量莪术及其制剂中倍半萜类、姜黄素类成，但没有同时测定倍半萜及姜黄素类成分的研究报道。本发明建立了HPLC-DAD同时测定莪术中倍半萜及姜黄素类成分的方法，有助于更全面的控制莪术的质量。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种倍半萜类及姜黄素类成分同时测定的方法，特别适用于莪术中这两大类成分的含量测定。

根据本发明提供的一种倍半萜类及姜黄素类成分同时测定的方法，步骤和条件如下：

色谱条件：色谱柱：直径和长度为4.6mm×250mm,5μm的Hanbon ODS-2C18，流动相：A：0.05%甲酸乙腈，B：0.05%甲酸水，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长216nm，430nm,流速1.0ml/min，进样量20μl，采样时间65min；

梯度洗脱液的配制方法如下：

对照品溶液的制备：精密称取莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、姜黄素，去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对照品适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液；分别精密取各储备液适量，配制成混和标准品储备液，以上8个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.1674,0.098,0.0406,0.016,0.1125,0.0173,0.0193,0.0011mg/mL；

供试品溶液的制备：取含倍半萜和姜黄素类成分的药材，粉碎后过三号筛，得粉末0.5g，精密称定，加50mL90%乙醇，索氏回流提取至无色，50℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定容至5ml，摇匀，过直径为0.45μm的微孔滤膜，20μl进样；

含量测定:精密吸取对照品及供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

上述倍半萜和姜黄素类成分同时检测的方法，供试品溶液的制备中所述含倍半萜和姜黄素类成分的药材为莪术。

有益效果：采用本方法可简便可靠的对含倍半萜和姜黄素类成分的药材，特别是莪术中的五个倍半萜类成分和三个姜黄素类成分进行定量检测，同时检测这两大类成分有助于更全面的控制莪术的质量，本测定方法分别展开了线性关系考察，精密度试验，稳定性试验，重复性试验和加样回收率试验，结果认为该方法准确可靠。

附图说明

图1为检测波长216nm的混合标准品溶液高效液相色谱图，图2为检测波长430nm的混合标准品溶液高效液相色谱图，图3为检测波长216nm的样品1溶液高效液相色谱图，图4为检测波长430nm的样品1溶液高效液相色谱图。图中1为莪术二酮；2为莪术醇；3为吉马酮；4为呋喃二烯；5为β-榄香烯；6为双去甲氧基姜黄素；7为去甲氧基姜黄素；8为姜黄素。

具体实施方式

本发明所述的倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法是经过大量筛选试验得到的最优方案，结合具体实施方式，对本发明进一步说明如下：

1药材、仪器与试剂

药材来源：莪术药材购自莪术主产地（浙江、广西、四川），经南京中医药大学巢建国教授鉴定为姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Valeton)、广西莪术(Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)或温郁金(Curcuma wenyujin Y·H·Chen et C·Ling)的干燥根茎。粉碎过60目筛备用。药材情况及生产批号见表1：

表1样品一般情况