[发明专利]一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法

说明书

技术领域

本发明属蜂胶质量控制领域，涉及一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法，用于鉴别酒神菊属型蜂胶，评价酒神菊属型蜂胶的质量优劣。

背景技术

蜂胶是蜜蜂采集植物叶芽或树皮裂缝处分泌的树脂并混入上颚腺分泌物和蜂蜡而成的芳香固体物。蜂胶具有抑菌、抗原生动物、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、调节血脂血糖、提高免疫力等多种生理药理活性。但蜂胶的化学成分和药理活性依蜂胶采集的地理位置不同而变化很大。

根据蜂胶的植物来源，世界上的蜂胶主要可以分为五种类型：杨树型、酒神菊属型、克鲁西属型、血桐属型和地中海地区类型。其中，酒神菊属型蜂胶是目前国内外商业上最流行、研究最多的蜂胶类型之一，现已广泛应用于保健食品中来改进人类健康和预防疾病。

酒神菊属型蜂胶采自巴西东南部和中西部地区，其植物来源是Baccharis dracunculifolia DC.，其主要成分为异戍烯苯丙类和p-香豆酸的异戊烯基衍生物，黄酮类化合物含量较低。酒神菊属型蜂胶进口至中国已有十余年历史，由于缺少酒神菊属型蜂胶的质量评价方法，酒神菊属型蜂胶的质量控制参照中国蜂胶的国家标准。而中国的蜂胶主要植物来源为杨属及其杂交属，主要活性成分为类黄酮，蜂胶标准中也是以类黄酮含量的高低为依据判断蜂胶质量优劣。参照中国的蜂胶国家标准，酒神菊属型蜂胶的总黄酮含量达不到国家标准的要求，酒神菊属型蜂胶的销售企业只能参照中国的国家标准制定各自的企业标准。由于缺少合理的酒神菊属型蜂胶质量评价方法，导致不同企业甚至同一企业不同批次的酒神菊属型蜂胶的质量良莠不齐。此外，由于酒神菊属型蜂胶的售价要高出中国杨树型蜂胶售价的数倍，市场上出现了以中国蜂胶甚至杨树胶（杨树芽提取物）冒充酒神菊属型蜂胶的现象。因此，亟需建立酒神菊属型蜂胶的质量控制方法以利于酒神菊属型蜂胶产业在中国的健康发展。

Artepillin C（3-[4-羟基-3,5-二（3-甲基-2-丁烯基）苯基]-2-(E)-丙烯酸; 3,5-二异戊烯基-4-羟基肉桂酸），分子量为300.40，是一种2,4,6-三取代苯酚类物质。其化学结构为：

目前，在世界各种蜂胶类型中，仅在酒神菊属型蜂胶中发现含有阿替匹林C。而且，阿替匹林C具有多种生理药理活性，如抗菌、抗氧化、抗肿瘤和诱导凋亡等活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法，用于区分酒神菊属型蜂胶与其它类型蜂胶和杨树胶、评价酒神菊属型蜂胶的质量优劣。解决了酒神菊属型蜂胶鉴别及质量控制中的一个重要的技术问题。本发明先对供试样品进行冷冻粉碎混匀，然后用乙醇超声波提取，过滤浓缩制得浸膏，然后用甲醇超声溶解，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定，以阿替匹林C的有无确定是否为酒神菊属型蜂胶，以阿替匹林C含量的高低作为鉴别酒神菊属型蜂胶质量优劣的标准。

具体的本发明通过以下方案实现： 

（1） 准确称取阿替匹林C标准品10 mg，用甲醇定容为10 mL，制得阿替匹林C标准储备液；根据需要吸取一定量的阿替匹林C标准储备液，用甲醇稀释定容，配制成适当浓度的标准工作液，分别用微孔膜过滤，用HPLC进行分析，绘制阿替匹林C标准曲线；

（2）取一定量的供试样品进行冷冻粉碎混匀，然后用体积比为85%的乙醇的超声波提取，料液比1∶15，过滤浓缩制得浸膏，然后用纯甲醇超声溶解，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定，每个样品重复3次；

（3） 将供试蜂胶样品色谱图与阿替匹林C标准品色谱图比较以鉴别出酒神菊属型蜂胶；

（4）根据标准曲线计算阿替匹林C含量，评价酒神菊属型蜂胶的质量优劣，通过与阿替匹林C标准品对照，如果HPLC谱图中检测到阿替匹林C色谱峰，则表明为酒神菊属型蜂胶，如果相应位置不出峰，则不是酒神菊属型蜂胶；如果酒神菊属型蜂胶中阿替匹林C含量高于4.0%，则为优质蜂胶；如果酒神菊属型蜂胶中阿替匹林C含量低于2.0%，则为劣质蜂胶。

本发明所述的液相色谱仪的条件为：流速为1.0 mL/min，检测波长为310 nm，进样量为2 μL，色谱柱为Sepax HP-C18（4.6×150mm, 5μm）或相当的色谱柱，柱温为30℃。

本发明所述的流动相为纯甲醇和体积比为1%的乙酸水溶液按体积比梯度洗脱，洗脱程序为：0-30 min，甲醇25-55%；30-60 min，甲醇55-80%；60-70 min，甲醇80-95%；70-80 min，甲醇95-25%。