[发明专利]基于Taqman探针的水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR快速检测方法

权利要求书

1.一种基于Taqman探针的快速检测水产品中麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取TCBS平板上的可疑菌落的基因组DNA并稀释备用；再利用麦氏弧菌保守性强的基因组DNA序列设计特异性引物和探针；最后使用该引物和探针对待测水产品TCBS平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和荧光信号的检测；其中所述的麦氏弧菌特异性引物为：

上游引物Vmetschnikovii -1：5'- GCTATTCGAAAGTTTATTCTTC -3'；

下游引物Vmetschnikovii -2：5'- CCAAGATGGTCGATATCATC -3'；

特异性TaqMan探针为：

Vmetschnikovii-3：5'- CGTAGGTCGTATGAAGTTCAATAGT-3'。

2.根据权利要求1所述的基于Taqman探针的快速检测麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其反应总体积为25μL，包括提取的基因组DNA，2μL；10×PCR buffer，2.5μL；Mg²⁺，2mmol/L；Taq酶2U；UNG酶 1U；dNTP，0.2mmol/L；麦氏弧菌特异性引物 10pmol；TaqMan探针5pmol，最后加灭菌去离子水至25μL。

3.根据权利要求1所述的基于Taqman探针的快速检测麦氏弧菌的荧光定量PCR方法，其荧光定量PCR仪器的程序参数为：94℃ 预变性5min；94℃ 变性30s，58℃退火 30s，同时收集FAM荧光，72℃延伸 30s ，40个循环。