[发明专利]一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法

权利要求书

1.一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，所述氨基酸包括：天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸。

2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

供试品溶液的制备：称取金水宝胶囊内容物，加浓盐酸，加热水解，水解物加盐酸溶解，加异硫氰酸苯酯，三乙胺衍生化，加入正己烷，取下层液，加水定容，过滤；

对照品溶液的制备：取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量，加盐酸配制成混合溶液；

供试品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量；

其中的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙酸钠缓冲液为流动相A，乙腈水溶液为流动相B，进行梯度洗脱。

3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取金水宝胶囊内容物25-100mg至5-20ml的安瓿瓶中，加浓盐酸1-4ml，水1-4ml，熔封；至100-200℃的烘箱中水解0.5-2h，取出冷却，将水解物转移至干锅中蒸干，残渣加0.05-0.2mol/L盐酸试液溶解转移至10-50ml的容量瓶中，过滤，取续滤液2.5-10ml至三角瓶中，加异硫氰酸苯酯1-5ml，三乙胺1-5ml，衍生化0.5-2小时，加入正己烷5-20ml振摇，静止5-20min，取下层液0.5-2ml至2.5-10ml容量瓶中，加纯净水定容，过微孔滤膜即得；

对照品溶液的制备：取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量，加0.05-0.2mol/L的盐酸溶液配制成浓度各为0.03-0.12，0.03-0.12，0.015-0.06，0.015-0.06，0.02-0.08，0.015-0.06，0.02-0.08，0.02-0.08，0.015-0.06，0.015-0.06，0.02-0.08，0.015-0.06，0.02-0.08，0.005-0.02，0.005-0.02，0.005-0.02mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为10-50cm，内径为2-8mm，粒径为2-10μm；以pH=5-7的乙酸钠缓冲液为流动相A，60-90%的乙腈水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；柱温为20-60℃；检测波长为250-260nm，理论板数按缬氨酸峰计算应不低于3000-6000。

4.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

供试品溶液的制备：精密称取经匀质处理的金水宝胶囊内容物约50mg至10ml的安瓿瓶中，加浓盐酸2ml，水2ml，熔封；至150℃的烘箱中水解1h，取出冷却，将水解物转移至干锅中蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸试液溶解转移至25ml的容量瓶中，过滤，取续滤液5ml至三角瓶中，加异硫氰酸苯酯试液2.5ml，三乙胺试液2.5ml，衍生化1小时，加入正己烷10ml振摇，静止10min，取下层液1ml至5ml容量瓶中，加纯净水定容，过微孔滤膜；

对照品溶液的制备：另取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量，加0.1mol/L的盐酸溶液配制成浓度各为0.06、0.06、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.04、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.01、0.01、0.01mg/ml的混合溶液；

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量；

其中的色谱条件如下：照中华人民共和国药典2010年版附录ⅥD高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm；以pH=6.5的乙酸钠缓冲液为流动相A，80%的乙腈水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；柱温为40℃；检测波长为254nm，理论板数按缬氨酸峰计算应不低于5000；其中乙酸钠缓冲液的制备方法如下：取乙酸钠7.587g，加水850ml溶解，用乙酸调pH至6.5，再加水75ml，乙腈70ml，过滤、超声即得；

流动相梯度洗脱表