[发明专利]基于纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极及其制备方法和应用

权利要求书

1.基于纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极，其特征在于：所述电极是在沉积纳米金的电极表面通过ZnO溶胶-凝胶固定促红细胞生成素受体作为识别元件，再在电极表面沉积纳米金的玻碳电极。

2.权利要求1所述基于纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.将玻碳电极表面打磨，抛光，清洁，干燥，得预处理玻碳电极，备用；

b.将步骤a所得预处理玻碳电极浸入HAuCl₄溶液中，电沉积，清洗，得沉积纳米金的玻碳电极，备用；

c.将乙酸锌溶于无水乙醇中，再在超声波作用下加入氢氧化锂，得ZnO溶胶-凝胶溶液，备用；

d.将步骤c所得ZnO溶胶-凝胶溶液与促红细胞生成素受体溶液混匀，滴加至步骤b所得沉积纳米金的玻碳电极表面，干燥成膜，洗涤，即制得促红细胞生成素受体修饰电极；

e.将步骤d所得促红细胞生成素受体修饰电极再次浸入HAuCl₄ 溶液中，电沉积，清洗，最后浸入BSA溶液中封闭非特异性位点，得纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a是用均相砂纸打磨玻碳电极，然后依次用加有0.3μm和0.05μm三氧化二铝的湿润抛光纸抛光，每次抛光后用水洗净，再依次于硝酸、丙酮和水中超声洗涤，干燥备用。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤b是将步骤a所得预处理玻碳电极浸入浓度为1-20mmol/L的HAuCl₄溶液中，电沉积20-100秒，然后用水清洗，备用。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤b是将步骤a所得预处理玻碳电极浸入浓度为10mmol/L的HAuCl₄溶液中，电沉积60秒，然后用水清洗，备用。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤c是将乙酸锌溶于无水乙醇中制成浓度为0.1mol/L的溶液，再在超声波作用下加入氢氧化锂至终浓度为0.067mol/L，制得ZnO溶胶-凝胶贮备液，临用前用无水乙醇按体积比为2:1~1:3进行稀释，制得ZnO溶胶-凝胶溶液。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤d是将步骤c所得的ZnO溶胶-凝胶溶液与浓度为10ng/L~100μg/L的促红细胞生成素受体溶液按照体积比为4:1~1:1.15混合均匀，再将混合液滴加在步骤b所得沉积纳米金的玻碳电极表面，空气中干燥，用磷酸盐缓冲液充分洗涤，制得促红细胞生成素受体修饰电极。

8.根据权利要求2-7任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤e是将步骤d所得促红细胞生成素受体修饰电极再次浸入浓度为1-20mmol/L的HAuCl₄ 溶液中，电沉积10-50秒，清洗，最后浸入质量分数为2.5% 的BSA溶液中1小时，封闭非特异性位点，得纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极。

9.促红细胞生成素和重组人促红细胞生成素电化学生物传感器，其特征在于：包括工作电极、对电极、参比电极和测试底液；所述工作电极为权利要求1所述的纳米金和促红细胞生成素受体修饰的电极，对电极为铂电极，参比电极为饱和甘汞电极；所述测试底液为含有2mmol/L K₃[Fe(CN)₆]和2mmol/L K₄[Fe(CN)₆]且pH为6.2~9.0的磷酸盐缓冲液。

10.利用权利要求9所述的电化学生物传感器检测促红细胞生成素和/或重组人促红细胞生成素的方法，其特征在于，将纳米金和促红细胞生成素受体修饰电极与样品溶液共孵育20分钟以上，然后以纳米金和促红细胞生成素受体修饰电极为工作电极、铂电极为对电极、饱和甘汞电极为参比电极、含有2mmol/L K₃[Fe(CN)₆]和2mmol/L K₄[Fe(CN)₆]且pH为6.2~9.0的磷酸盐缓冲液为测试底液构建电化学生物传感器，采用循环伏安法进行扫描测定，电位扫描范围为-0.3V~0.7V，电位扫描速率为10 mv/s ~100mv/s，根据电位0.14V~0.17V处的峰电流和促红细胞生成素标准曲线计算样品溶液中促红细胞生成素的浓度，和/或根据电位0.06V~0.09V处的峰电流和重组人促红细胞生成素标准曲线计算样品溶液中重组人促红细胞生成素的浓度。